Priming por IFN-gama durante a fase crônica da malária experimental: estudo dos mecanismos moleculares e efetores envolvidos

Resumo

Introdução: Os mecanismos pelos quais a imunidade protetora ao Plasmodium é perdida na ausência de exposição contínua ao parasita ainda não foram bem elucidados. O IFN-³ produzido durante a malária aguda em humanos e camundongos estimula a resposta imune aos agonistas de toll-like receptors (TLRs) por um mecanismo denominado priming (onde concentrações sub-ótimas de IFN-³ no microambiente imunológico induzem uma maior capacidade, em células do sistema imune, de responder a certos estímulos posteriormente, por exemplo resposta a agonistas de TLRs). Mais ainda, recentemente, nosso grupo de pesquisa mostrou que tal mecanismo se mantém durante a fase crônica da malária experimental. Resumidamente, nós verificamos que a manutenção do priming induzido por IFN-³ correlaciona com maiores números de linfócitos T de memória efetora/efetores. Quando a parasitemia remanescente é totalmente eliminada, tal efeito é abolido, o que está relacionado com a perda da capacidade de responder à reinfecção pelo parasita. Quando tratamos os animais curados com doses sub-ótimas de IFN-³, estes camundongos recuperam a capacidade de responder às reinfecções, e os números de linfócitos T de memória efetores e T efetoras aumentam novamente, assim como a capacidade de responder aos agonistas de TLR. Desta forma, mostramos que o priming por IFN-³ parece ser importante para a manutenção da imunidade protetora à malária experimental. Enunciado do problema: Por outro lado, os mecanismos moleculares por trás da importância do priming por IFN-³ durante a fase crônica, bem como os mecanismos efetores afetados por este fenômeno ainda não foram elucidados. Objetivos centrais: Considerando estes aspectos, os objetivos deste projeto são avaliar, na malária experimental: A) os mecanismos moleculares por trás da importância do priming na manutenção dos linfócitos T CD4+ de memória, e B) os mecanismos efetores que supostamente são modulados pelo priming. Estratégias experimentais: Para a elucidação destes objetivos, utilizaremos quatro estratégias experimentais diferentes, em animais cronicamente infectados: 1) Avaliar a importância da presença do receptor para IFN (IFNR) em linfócitos T CD4+ de memória, através de estudos utilizando camundongos CD4KO transferidos adotivamente com linfócitos T CD4+ provenientes de camundongos C57BL/6 e IFNRKO; 2) Avaliar a expressão gênica das células T CD4+ de memória efetora ou central, e efetora, assim como de células apresentadoras de antígeno, face ao estímulo direto com doses sub-ótimas de IFN-³, tanto in vivo quanto in vitro, assim como avaliar a expressão gênica dos linfócitos T CD4+ dos animais transferidos adotivamente em (1); 3) Avaliar a expressão (por citometria de fluxo) de proteínas induzidas pelo IFN-³ em células T CD4+ e células apresentadoras de antígeno face ao priming por IFN-³; e 4) Quantificar, por métodos in vivo, ex vivo e in vitro, a capacidade fagocítica de diferentes células esplênicas na presença ou não do priming por IFN-³.Resultados esperados: Esperamos, a partir das estratégias experimentais listadas acima: 1) verificar se o priming por IFN-³ durante a malária experimental crônica age apenas em células da imunidade inata, ou se há um efeito direto em células T CD4+ de memória; e 2) verificar, em nosso modelo, em qual grau o priming por IFN-³ influencia na capacidade das células do baço em eliminar os parasitas da circulação.Contribuição esperada para a área: Acreditamos que a elucidação destes processos será de fundamental importância para o entendimento da resposta imune ao Plasmodium, com possíveis implicações no desenvolvimento e aperfeiçoamento de estratégias de vacinação contra a malária. Apoios existentes: Esse estudo é plenamente condizente com os trabalhos que vêm sendo desenvolvidos pelo nosso grupo de pesquisa com o apoio da FAPESP (auxílio regular à pesquisa, bolsas de Mestrado e Doutorado) e do CNPq (bolsa de produtividade). (AU)