Produção e caracterização de células multipotentes e pluripotentes induzidas em Blastocerus dichotomus

Resumo

A criopreservação de gametas e embriões é de extrema importância para a manutenção de diversidade genética em pequenas populações selvagens, porém estes materiais são de difícil obtenção. Estudos realizados com células-tronco pluripotentes induzidas (iPS) humanas e de camundongo mostraram-se capazes de se diferenciar em células germinais, espermatozoides e oócitos. Estudos sobre iPS em cervídeos são inéditos, logo temos como enfoque neste projeto estabelecer protocolos para a obtenção de linhagens iPS estáveis na espécie Blastocerus dichotomus para produzir gametas viáveis no futuro. Este projeto propõe a derivação de células iPS a partir das linhagens multipotentes (gordura e chifres) e comparação com linhagem unipotente (pele), que será conduzida por meio de transfecção gênica utilizando-se transposons PiggyBac. Os cultivos para derivação das iPS serão feitos em presença de fibroblasto embrionários de camundongo (MEF) bloqueados pela mitomicina, e as colônias selecionadas serão repicadas para manter linhagens para posterior caracterização por meio de testes imunocitoquímicos, RT-qPCR, atividade da fosfatase alcalina, corante lacZ, cariótipo, capacidade de diferenciação in vitro em corpos embrióides, diferenciação em células da linhagem germinativa de fêmeas e avaliação de marcadores dos tecidos oriundos dos três folhetos embrionários. Posteriormente, serão realizados testes para tentar derivar as iPS em gametas feminino e masculino. (AU)