Caracterização de polipeptídeos moduladores de angiogênese derivados da degradação de cininogênio e fibrinogênio pela Bothropasina

Resumo

O processo de angiogênese, a geração de novos vasos sanguíneos a partir de uma rede pré-existente de capilares, requer a degradação da membrana basal por células endoteliais, a migração e proliferação das mesmas em resposta a um balanço positivo entre fatores pró- e anti-angiogênicos. Organismos adultos costumam ter a angiogênese suprimida em condições normais; podendo ativá-la: de forma transitória em condições fisiológicas específicas como o ciclo menstrual feminino e reparação de tecidos; de forma permanente em condições patológicas como nas artrites reumáticas e variados tipos de câncer metastáticos. Nos últimos anos os esforços para identificação de moduladores desse processo têm revelado que fragmentos críticos (i.e. Tunstatina e Endostatina) gerados pela proteólise de moléculas constituintes da membrana basal (i.e. colágeno IV e XVIII) podem apresentar efeitos anti e/ou pró-angiogênico ausentes da molécula de origem. Nesse contexto, o presente projeto pretende explorar a ação bem conhecida das enzimas proteolíticas dos venenos de serpentes do gênero Bothrops sobre componentes do plasma sanguíneo que extravasam para o espaço periendotelial devido a alteração de permeabilidade celular em eventos inflamatórios, como ferramenta para geração de novos moduladores de migração, proliferação e adesão de células endoteliais. Assim, utilizaremos enzimas proteolíticas classificadas como metaloproteases purificadas a partir do veneno de B. jararaca e estudadas em rotina em nosso laboratório, na digestão de dois substratos que são componentes estruturais da MB e do plasma sanguíneo: cininogênio e fibrinogênio. Os polipeptídeos resultantes serão fracionados em gel e recuperados para os seguintes procedimentos: ensaios celulares de migração, proliferação, adesão e efeito sobre atividades enzimáticas específicas. (AU)