Diferenciação odontoblástica e deposição de matriz mineralizada por células tronco da polpa dental semeadas em scaffolds de nanofibras associados a substâncias bioativas

Resumo

Neste estudo, será avaliada a diferenciação odontoblástica de células tronco da polpa dental (DPSCs), bem como seu potencial em depositar matriz mineralizada, semeadas sobre scaffolds de nanofibras na presença ou não de substâncias bioativas. Para tanto, scaffolds de nanofibras de Poli (L-latic acid) (NF-PLLA) e microesferas ocas, obtidas a partir de nanofibras de star-shaped PLLA (HNF-SSPLLA) serão fabricados e posicionados em placas de 24 compartimentos. Em seguida, DPSCs de dentes humanos serão semeadas sobre os scaffolds (1.000.000 células), sendo o conjunto incubado por 24 horas a 37oC e 5% CO2 em meio de cultura completo (alfa-MEM). Após este período, o meio de cultura será substituído por meio de diferenciação osteogênica (contendo ácido arcorbico e beta-glicerofosfato), contendo 10-8 M de dexametasona e/ou 10-6 M de sinvastatina. Meio osteogênico sem as substâncias bioativas será empregado como grupo controle. As células serão incubadas por até 4 semanas nas diferentes condições experimentais, sendo a proliferação (total de DNA) e morfologia (MEV) celular analisadas a cada semana. Ainda, após 1 e 2 semanas de cultivo, a atividade de fosfatase alcalina (p-nitrophenyl phosphate assay) será avaliada, e o total de cálcio depositado (calcium assay kit) será quantificado após 4 semanas. A expressão gênica de marcadores da diferenciação odontoblástica (OCN, Col I e DSPP - PCR real time) será analisada após 1, 2 e 4 semanas. Analise histológica da migração celular nos scaffolds (H&E), deposição de colágeno (tricrômico de Masson) e deposição de cálcio (Von Kossa), bem como a expressão de DSP i(munohistoquimica), serão avaliados após 4 semanas em cultura. Os dados serão submetidos a análise estatística específica. (AU)