Investigação microbiológica, condições de crescimento e potencial metabólico para a busca de produtos naturais bioativos no fungo endofítico AC-1 isolado de Annona cacans

Resumo

Este projeto de pesquisa tem como objetivo a investigação microbiológica, das condições de crescimento e de produção de metabólitos secundários em estudo biotecnológico com linhagem de fungo endofítico AC-1 isolado das folhas de Annona cacans (Anonaceae), com vistas à obtenção de substâncias bioativas a partir do estudo químico/biológico do extrato bruto deste fungo endofítico. Para tanto proceder-se-á o isolamento e a identificação do fungo empregando os meios de cultura sólidos: ágar extrato de malte (MEA), ágar sintético pobre em nutrientes (SNA), ágar farinha de aveia (OA), ágar Sabouraud-Dextrose (ASD), ágar batata-dextrose (PDA) e ágar Czapek (Cz). Para a extração dos metabolitos primários (lipídeo e proteína) será usado o caldo Sabouraud como meio de cultura e para a extração dos metabolitos secundários, serão usados meios de culturas líquidos (300 mL em pequena escala) tais como: Czapek, extrato de malte (ME), extrato de levedura e malte (YM), Sabouraud-Dextrose e Nutritivo, á 25°C, sob agitação. Para os metabolitos primários, será realizada a extração de proteínas e lipídios. Para a obtenção do extrato bruto (metabólito secundário) a partir dos meios de cultura líquidos, o caldo será separado do micélio por filtração e submetido à extração líquido/líquido com acetato de etila (AcOEt), fornecendo o extrato bruto, após a evaporação do solvente em rota-evaporador sob pressão reduzida. O estudo será monitorado pela atividade antimicrobiana (frente a bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e espécies de Candida spp.) e pela atividade antioxidante (métodos DPPH e ORAC-FL), sendo selecionados para fracionamento, isolamento e identificação de substâncias bioativas dos extratos com melhores resultados em termos de bioatividade e de rendimento em massa de extrato. O extrato selecionado para estudo químico/biológico que se mostrar mais promissor será cultivado em escala ampliada, no meio selecionado após a triagem, fornecendo o extrato bruto, que será fracionado por procedimentos cromatográficos diversos. Os metabólitos purificados, pelo emprego de diferentes métodos cromatográficos (cromatografia em coluna, cromatografia em camada delgada preparativa e CLAE), terão suas estruturas moleculares determinadas utilizando-se métodos espectroscópicos de análise (IV, UV-vis, RMN 1H, RMN 13C (1D e 2D) e espectrometria de massas) e serão submetidas aos ensaios para avaliação das atividades antimicrobiana e antioxidante. Assim, realizar-se-á o estudo para a busca de novos agentes bioativos potenciais e a implementação de estudos racionais da química de microorganismos endofíticos.