Desenvolvimento de uma ribonucleotídeo redutase recombinante de Lactobacillus leichmannii para a produção de desoxirribonucleotídeos trifosfato (dntps)

Resumo

As etapas envolvidas nesse processo consistem em: amplificação e clonagem do gene da enzima LJRNR para construção de sistemas de expressão heteróloga em E. coli; testes de expressão e purificação em escala laboratorial, onde serão avaliados o perfil de expressão empregando diferentes vetores de expressão, cepas bacterianas e condições de expressão; caracterização da enzima recombinante produzida; otimização da reação de redução e produção de dNTPs. O resultado esperado para esta fase será a obtenção da proteína LIRNR de forma pura e ativa, através de protocolo padronizado, permitindo o desenvolvimento do processo de produção de dNTPs através da catálise da redução de ribonucleotídeos. A viabilização desse processo produtivo permitirá a comercialização de dNTPs, um reagente básico com elevado valor agregado (cerca de 1.000 vezes quando comparado ao custo da matéria prima). Além disso, sua disponibilidade com custos reduzidos facilitará a produção de uma série de análogos marcados com sondas fluorescentes, reagentes inovadores e com crescente demanda em pesquisa, a exemplo do desenvolvimento de fármacos inibidores de quinases. Propõe-se, portanto, contribuir para o processo de nacionalização da produção de reagentes básicos de biologia molecular, diminuindo custos e tempo de comercialização, essencial para o fortalecimento e competitividade da pesquisa no Brasil. (AU)