SISTEMAS MICROFLUÍDICOS PARA A INCORPORAÇÃO DE SMALL INTERFERING RNA (siRNA) EM LIPOSSOMAS CATIÔNICOS E PARA TRANSFECÇÃO IN VITRO DE CÉLULAS DE MAMÍFEROS DESTINADOS À TERAPIA GÊNICA

Resumo

Este projeto de pesquisa tem como objetivo o desenvolvimento tecnológico de sistemas microfluídicos para incorporar small interfering RNA (siRNA-silenciador) em lipossomas catiônicos (LCs), de dimensões nanométrica a fim de obter vetores não-virais, visando aplicações na área de terapia gênica. A terapia gênica é uma técnica promissora, que introduz uma cópia correta do gene defeituoso para tratamento de doenças genéticas. A produção de complexos de LCs-siRNA utilizando tecnologia microfluídica, que processa fluidos em pequenas quantidades, possibilita a operação em regime contínuo e uma única fase. O projeto será dividido em três etapas: Na primeira etapa do trabalho, será realizado o desenvolvimento do dispositivo microfluídico e o estudo da complexação eletrostática entre LCs convencionais e siRNA em microcanais, sendo comparado ao processo convencional de complexação em "bulk". Na segunda etapa, a composição dos lipossomas será alterada com a inclusão de lipídeos derivatizados que contenham polietileno glicol-fosfatidiletanolamina-distearoil, com folato (PEG-DSPE-Folato), gerando lipossomas do tipo STEALTH, com direcionamento específico para células que possuem receptores folato em sua superfície e a eficiência da nova composição será comparada ao sistema convencional. No final das etapas, serão avaliadas as propriedades físico-químicas e bioquímicas dos complexos. Na terceira etapa, as melhores estruturas lipídicas contendo siRNA desenvolvidas nas etapas anteriores serão transfectados nas células HeLa Reporter Cells (HeLa), que expressam Green Fuorescent Protein (GFP) estavelmente dentro de sistemas microfluídicos, como análise de transfecção dinâmica. O nível de expressão da GFP será visualizado e definido em microscópio fluorescente e a eficiência de transfecção será comparada com método convencional em poços.