Comunidades polimicrobianas em fluidos de hemodiálise: fator de risco para morbimortalidade em pacientes renais crônicos

Resumo

Bactérias e fungos formam complexas estruturas associadas à superfícies, denominadas biofilmes. Fatores ambientais tais como pH, temperatura, disponibilidade de nutrientes e de oxigenação além da expressão de genes que estimulam ou inibem vias metabólicas também influenciam na adaptação do modo planctônico ou livre para o modo biofilme de crescimento dos organismos. Contudo, interações entre bactéria-fungo em biofilmes dupla ou tripla-espécie, em microambientes nosocomiais tais como circuito hídrico de Serviços de hemodiálise, bem como a influência de fatores ambientais tais como a oxigenação sobre essas comunidades mistas não são encontrados na literatura. Assim, este estudo propõe avaliar a interação que ocorre entre as bactérias (Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Mycobacterium gordonae e Staphylococcus epidermidis) e fungos (Candida parapsilosis, Aspergillus niger e Fusarium spp) na formação de biofilmes mistos em condições de aerobiose e microaerofilia. Adicionalmente será quantificada a endotoxina liberada pelos biofilmes gerados por Gram-negativos bem como a sensibilidade de todos os biofilmes propostos frente à três antimicrobianos. Serão utilizadas cepas provenientes de circuito hídrico de um Serviço de Hemodiálise hospitalar para indução de formação de biofilme em microplacas (96 poços), sendo que as metodologias de descoloração do cristal violeta e de redução de XTT {sódio 3´-[1-(fenilaminocarbonil]- 3,4-tetrazolium]-bis (4-metoxi-6-nitro) ácido benzeno sulfônico hidratado}, determinarão a biomassa e a viabilidade celular dos biofilmes, respectivamente. A fotodocumentação por microscopia eletrônica de varredura evidenciará a morfologia e a topografia dos biofilmes, enquanto que a microscopia confocal a laser auxiliará na localização dos organismos no biofilme. A liberação de toxinas pelas bactérias Gram-negativas do biofilme será quantificada pelo ensaio de "Limulus amebocyte lysate", após o tempo de maturação dos mesmos. A eficácia de antimicrobianos frente aos biofilmes propostos será realizada em placas de microtitulação com quantificação das células viáveis por plaqueamento em ágar. O estudo poderá alertar para a necessidade de inclusão de biofilmes nas padronizações de águas utilizadas em Serviços de diálise pelos órgãos regulatórios, pois estas são focadas na forma livre de crescimento dos organismos. Destaca-se também o pioneirismo nacional e internacional do estudo abrangendo uma temática de importância incontestável, pois a produção mundial de líquido de diálise é de cerca de 25.000 milhões de litros, o que o torna um dos maiores produtos por volume utilizado na medicina. (AU)