Participação de auinases de adesão focal na diferenciação osteoblástica de células-tronco mesenquimais induzida por superfícies de titânio com micro e nanotopografia

Resumo

As integrinas são proteínas transmembrana constituídas por duas subunidades (± e ²) e tem como função primária a adesão celular e alguns de seus membros estão envolvidos no processo de diferenciação osteoblástica. As integrinas são capazes de sinalizar em ambas as direções da membrana celular, ativando várias proteínas tirosina quinases e duas vias de sinalização que envolvem as FAK (focal adhesion kinases, quinases de adesão focal). Trabalhos mostram que as FAK fazem parte dos mecanismos de transdução do sinal que promovem a maturação dos osteoblastos em células já comprometidas com o fenótipo osteogênico. Além disso, as FAK participam dos estágios iniciais de diferenciação de células-tronco mesenquimais (CTMs) humanas em osteoblastos. Sendo assim, o desenvolvimento de biomateriais que possam modular a interação entre integrinas e matriz extracelular via FAK, representa uma estratégia importante para terapias com implantes osseointegráveis. Considerando a relevância dessas quinases na sinalização de integrinas, o objetivo do presente estudo é investigar o papel das FAK na diferenciação osteoblástica de CTMs induzida por nanotopografia de superfície de titânio (Ti) comparada a uma superfície de Ti com microtopografia comercialmente disponível em implantes dentários osseointegráveis e à superfície usinada não tratada (controle). Para isso, utilizaremos o composto PF-573228, um inibidor específico das FAK e após a seleção da concentração ideal desse composto, as células serão cultivadas sobre as três superfícies avaliadas, com ou sem o PF-573228, e serão avaliados os seguintes parâmetros: (1) expressão gênica das FAK e dos marcadores osteoblásticos, Runx2, osterix, fosfatase alcalina, osteocalcina, osteopontina e sialoproteína óssea por PCR em tempo real, aos 3, 7 e 10 dias, (2) a atividade da fosfatase alcalina, aos 10 dias e (3) a formação de matriz extracelular mineralizada por coloração com vermelho de alizarina, aos 21 dias.