Investigação da formação de inflamassoma em pacientes com anemia falciforme

Resumo

A hemoglobinopatia, Anemia Falciforme (AF), apresenta uma fisiopatologia complexa resultante de um estado inflamatório crônico fundamental para o início e propagação dos processos vaso-oclusivos associados à doença, bem como muitas das manifestações associadas à síndrome torácica aguda, hipertensão pulmonar, AVC e nefropatia. Acredita se que o estado inflamatório crônico da AF é resultado do processo hemolítico intravascular e de isquemia/reperfusão; por sua vez, o processo vaso-oclusivo é desencadeado pela adesão dos glóbulos vermelhos e leucócitos ao endotélio da microcirculação, formando uma barreira física para o sangue. A hidroxiuréia (HU) é a única droga aprovada, no momento, pelo FDA Americano para uso em adultos com AF; a droga modifica o processo da doença, melhorando parâmetros hematológicos e o tempo de hospitalização dos pacientes. Acreditamos que a formação de estruturas do inflamassoma nos leucócitos de indivíduos com AF possa contribuir de forma significativa para o seu estado inflamatório. O inflamassoma é um complexo proteico multimérico formado em células inflamatórias, sendo constituído por uma molécula sensora, NLRP3, uma proteína adaptadora para caspase-1, denominada ASC (Apoptosis associated speck like protein containing a CARD, proteína associada a apoptose) e a caspase-1. A formação do inflamassoma pode ser estimulada por uma série de moléculas liberadas durante um processo infeccioso ou durante danos teciduais/desequilíbrios metabólicos; estas moléculas são conhecidas como Padrões Moleculares Associados a Patógenos (PAMPs) e padrões moleculares associados a danos (DAMPs), respectivamente. Este projeto tem como objetivo confirmar a existência da formação de inflamassoma nos neutrófilos e monócitos de indivíduos com AF (sem e com tratamento de HU), bem como identificar os componentes deste complexo e os possíveis DAMPs que possam contribuir para a sua formação nesta doença. Para este fim, utilizaremos técnicas como ELISA, western blotting, citometria de fluxo, microscopia confocal e citometria de imagem (Amnis®, Millipore), a fim de identificar alvos terapêuticos e abordagens para limitar o estado inflamatório na AF. (AU)