Explorando o uso de nova tecnologia de edição de genoma como uma abordagem rápida para o estudo da biologia de topoisomerases em Trypanosoma cruzi

Resumo

Trypanosoma cruzi é um importante patógeno causador de Doença de Chagas. Devido a sua complexidade genética, e ao número limitado de ferramentas eficientes para editoramento gênico, poucos estudos e entendimento da biologia do parasita tem sido realizado. O sistema CRISPR- Cas9 tem sido adaptado e se mostrado como uma ferramenta eficiente para a manipulação gênica de Trypanosoma cruzi. Tem permitido o estudo de genes essenciais e avaliação de sua função, além de facilitar o estudo de famílias gênicas. A Cas9, no entanto, pode apresentar-se inespecífica, o que representa o maior desafio em editoramento gênico. Estudos recentes estabeleceram uma Cas9 geneticamente engenheirada, com reduzida inespecificidade, mantendo a robustez na clivagem alvo-específica, promovendo assim uma ferramenta para editoramento de alta especificidade. Está proposta se propõe a avaliar o potencial das novas enzimas Cas9 em T. cruzi, tendo como objeto de estudo os genes de topoisomerase. Tripanosomatídeos apresentam 6 genes, sendo que os estudos funcionais desses genes foram realizados principalmente em Trypanosoma brucei, devido a presença da maquinaria de RNA de interferência nesses parasitas. Os inibidores de topoisomerase estão entre os fármacos mais eficientes e mais usados contra câncer e bactérias, sendo, portanto, de grande relevância seu estudo em T. cruzi como um possível novo alvo terapêutico. A interrupção sistemática dos genes de topoisomerase usando as novas enzimas Casp9 pode levar a um melhor entendimento das possíveis funções das diferentes topoisomerases, além de otimizar a aplicação da tecnologia CRISPR-Cas9 em T. cruzi.