Desenvolvimento de linhagem de T. cruzi com expressão induzível de Cas9: uma ferramenta para edição genética

Resumo

A tecnologia CRISPR/Cas9 tem sido amplamente utilizada como uma ferramenta muito eficiente e versátil para manipulação genética e é uma técnica muito promissora a ser utilizada em estudos de T. cruzi. A obtenção de anticorpos específicos é demorada e nem sempre bem sucedida, assim a adição de tag em genes específicos no seu locus gênico facilitaria a caracterização de diversas proteínas neste parasito. Até agora, o sistema CRISPR/Cas9 foi utilizado em T. cruzi para knockdown de alguns genes onde a enzima Cas9 foi expressa constitutivamente. Entretanto, a atividade de Cas9 pode interferir em alguns estudos, como no reparo e replicação de DNA por exemplo. Desta forma proponho gerar uma linhagem celular que é capaz de expressar a enzima Cas9 sob a indução por tetraciclina por meio do vetor de expressão pTcINDEX. Esta linhagem Cas9-induzivel seria capaz de expressar altos níveis desta enzima por um período suficiente para permitir a edição gênica, porém ausente logo em seguida. Tal tecnologia disponível no laboratório seria uma ferramenta muito valiosa para nossos estudos futuros. (AU)