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Desenvolvimento de linhagem de T. cruzi com expressão induzível de Cas9: uma ferramenta para edição genética

Processo: 16/21283-9
Linha de fomento:Bolsas no Exterior - Pesquisa
Vigência (Início): 01 de maio de 2017
Vigência (Término): 31 de outubro de 2017
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
Pesquisador responsável:Simone Guedes Calderano
Beneficiário:Simone Guedes Calderano
Anfitrião: John Morrison Kelly
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Local de pesquisa : London School of Hygiene and Tropical Medicine, Inglaterra  
Assunto(s):Trypanosoma cruzi   Biologia molecular

Resumo

A tecnologia CRISPR/Cas9 tem sido amplamente utilizada como uma ferramenta muito eficiente e versátil para manipulação genética e é uma técnica muito promissora a ser utilizada em estudos de T. cruzi. A obtenção de anticorpos específicos é demorada e nem sempre bem sucedida, assim a adição de tag em genes específicos no seu locus gênico facilitaria a caracterização de diversas proteínas neste parasito. Até agora, o sistema CRISPR/Cas9 foi utilizado em T. cruzi para knockdown de alguns genes onde a enzima Cas9 foi expressa constitutivamente. Entretanto, a atividade de Cas9 pode interferir em alguns estudos, como no reparo e replicação de DNA por exemplo. Desta forma proponho gerar uma linhagem celular que é capaz de expressar a enzima Cas9 sob a indução por tetraciclina por meio do vetor de expressão pTcINDEX. Esta linhagem Cas9-induzivel seria capaz de expressar altos níveis desta enzima por um período suficiente para permitir a edição gênica, porém ausente logo em seguida. Tal tecnologia disponível no laboratório seria uma ferramenta muito valiosa para nossos estudos futuros. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
COSTA, FERNANDA CRISTINA; FRANCISCO, AMANDA FORTES; JAYAWARDHANA, SHIROMANI; CALDERANO, SIMONE GUEDES; LEWIS, MICHAEL D.; OLMO, FRANCISCO; BENEKE, TOM; GLUENZ, EVA; SUNTER, JACK; DEAN, SAMUEL; KELLY, JOHN MORRISON; TAYLOR, MARTIN CRAIG. Expanding the toolbox for Trypanosoma cruzi: A parasite line incorporating a bioluminescence-fluorescence dual reporter and streamlined CRISPR/Cas9 functionality for rapid in vivo localisation and phenotyping. PLoS Neglected Tropical Diseases, v. 12, n. 4 APR 2018. Citações Web of Science: 5.

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