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Desenvolvimento de linhagem de T. cruzi com expressão induzível de Cas9: uma ferramenta para edição genética

Processo: 16/21283-9
Linha de fomento:Bolsas no Exterior - Pesquisa
Vigência (Início): 01 de maio de 2017
Vigência (Término): 31 de outubro de 2017
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos
Pesquisador responsável:Simone Guedes Calderano
Beneficiário:Simone Guedes Calderano
Anfitrião: John Morrison Kelly
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Local de pesquisa: London School of Hygiene and Tropical Medicine, Inglaterra  
Assunto(s):Trypanosoma cruzi   Biologia molecular

Resumo

A tecnologia CRISPR/Cas9 tem sido amplamente utilizada como uma ferramenta muito eficiente e versátil para manipulação genética e é uma técnica muito promissora a ser utilizada em estudos de T. cruzi. A obtenção de anticorpos específicos é demorada e nem sempre bem sucedida, assim a adição de tag em genes específicos no seu locus gênico facilitaria a caracterização de diversas proteínas neste parasito. Até agora, o sistema CRISPR/Cas9 foi utilizado em T. cruzi para knockdown de alguns genes onde a enzima Cas9 foi expressa constitutivamente. Entretanto, a atividade de Cas9 pode interferir em alguns estudos, como no reparo e replicação de DNA por exemplo. Desta forma proponho gerar uma linhagem celular que é capaz de expressar a enzima Cas9 sob a indução por tetraciclina por meio do vetor de expressão pTcINDEX. Esta linhagem Cas9-induzivel seria capaz de expressar altos níveis desta enzima por um período suficiente para permitir a edição gênica, porém ausente logo em seguida. Tal tecnologia disponível no laboratório seria uma ferramenta muito valiosa para nossos estudos futuros. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
COSTA, FERNANDA CRISTINA; FRANCISCO, AMANDA FORTES; JAYAWARDHANA, SHIROMANI; CALDERANO, SIMONE GUEDES; LEWIS, MICHAEL D.; OLMO, FRANCISCO; BENEKE, TOM; GLUENZ, EVA; SUNTER, JACK; DEAN, SAMUEL; KELLY, JOHN MORRISON; TAYLOR, MARTIN CRAIG. Expanding the toolbox for Trypanosoma cruzi: A parasite line incorporating a bioluminescence-fluorescence dual reporter and streamlined CRISPR/Cas9 functionality for rapid in vivo localisation and phenotyping. PLoS Neglected Tropical Diseases, v. 12, n. 4 APR 2018. Citações Web of Science: 13.

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