Caracterização de um novo produto de hidrólise do xiloglucano resultante da ação sinérgica entre uma mistura de beta-galactosidase/alfa-xilosidase

Resumo

O xiloglucano é um dos mais abundantes polissacarídeos hemicelulósicos, sendo um dos principais responsáveis por manter as microfibrilas de celulose firmemente unidas, contribuindo, dessa forma, com a complexa rede de polissacarídeos que define a arquitetura da parede celular vegetal. Além disso, o xiloglucano desempenha tanto funções estruturais, quanto funções de sinalização e as enzimas que o modificam são de extrema importância na biologia vegetal. O estudo de enzimas ativas sobre carboidratos é essencial para o entendimento da estrutura da parede celular de plantas e para a elucidação dos mecanismos envolvidos na despolimerização da biomassa vegetal. Nosso laboratório tem se dedicado ao entendimento dos mecanismos de degradação enzimática dos polissacarídeos da parede celular de plantas e durante o curso do projeto de doutorado "Desenho racional de enzimas multifuncionais para a despolimerização de material lignocelulósico" (FAPESP 2012/24147-8), nós observamos um efeito sinérgico entre uma ²-galactosidase (YesZ de B. subtilis) e uma ±-xylosidase (YicI de E. coli) sobre os oligossacarídeos do xiloglucano de Jatobá (H. courbaril), que resultou na produção de um oligossacarídeo desconhecido como produto de hidrólise. Observamos também que YesZ é capaz de reagir com pNPGal na presença de xilose e liberar um produto de transgalactosilação entre xilose e galactose, e, diante disto, nós supusemos que este novo oligossacarídeo possa ser resultado de transgalactosilação. Dessa forma, propomos um estudo da composição e caracterização estrutural tanto do oligossacarídeo utilizado como substrato para YesZ, quando do produto obtido, resultante da atividade de trans-²-galactosidase. Para que isso seja realizado, será necessário realizar técnicas da análise de carboidratos, incluindo PACE (Polysaccharide Analysis by Carbohydrate gel Electrophoresis) e RMN (Ressonância Magnética Nuclear).