Modulação da termoestabilidade de uma ß-glucosidase estimulada por glicose e xilose empregando técnicas de glicosilação sítio dirigida

Resumo

A diminuição das reservas de combustíveis fósseis no mundo e aumento das preocupações ambientais resultantes do uso desses combustíveis, despertou um grande interesse na produção de etanol celulósico. Apesar de décadas de pesquisa, o conhecimento básico necessário para o processo de sacarificação enzimática total de resíduos lignocelulósicos ainda é deficiente, e um dos grandes desafios é vencer os custos associados ao uso de enzimas no processo, permitindo a sua viabilidade econômica. Isso deve ao fato de que a maioria das enzimas não reúnem todas as características necessárias para o processo, tais como: temperatura e pH ótimos de reação, estabilidade térmica e ao pH, alta eficiência catalítica para hidrólise do substrato natural, facilidade de expressão de grandes quantidades de enzima ativa em hospedeiros apropriados e tolerância aos produtos e subprodutos de reação. Como estratégia para o melhoramento das enzimas já conhecidas, a engenharia de proteínas tem sido muito empregada. Nesse projeto, pretende-se utilizar uma abordagem relativamente nova, conhecida como Glicosilação sítio dirigida, para melhorar as características de uma enzima já muito estudada e que reúne grande partes das características desejáveis destacadas anteriormente. Pretendemos engenheirar a ß-glucosidade de Humicola insolens, Bglhi, tornando-a mais termoestável com modulação e caracterização do seu conteúdo de carboidratos. Os resultados pretendidos poderão contribuir para esclarecer os fatores que afetam a termoestabilização de proteínas, contribuindo para a formulação de coquetéis enzimáticos mais eficientes para hidrólise da biomassa lignocelulósica, e, portanto, para viabilizar a produção de etanol de segunda geração, combustível renovável estrategicamente importante para o desenvolvimento do país. (AU)