Avaliação de riboswitch theo/metE para silenciamento gênico em Xanthomonas citri

Resumo

Estudos genéticos em qualquer organismo requerem ferramentas eficazes para se alterar a expressão gênica. Dentre estas, riboswitches oferecem uma alternativa bastante atrativa para modulação da expressão de genes de interesse, onde é possível ligar e desligar tais genes sem a remoção dos mesmos dos genomas. Esta alternativa permite o estudo direto de um gene e a avaliação da sua falta (quando desligado ou "OFF"), bem como permite o reestabelecimento do selvagem sem a necessidade da complementação padrão (estado "ON"). Na busca por melhores condições de caracterização genética e do desenvolvimento de ferramentas dedicadas para estudos de genes essenciais ou de difícil caracterização em Xac, pretendemos avaliar o uso de um sistema de riboswitch (theo/metE) para o controle de expressão gênica nesta bactéria. A caracterização propriamente dita será feita alterando-se a expressão de parB. A proteína ParB opera em segregação cromossômica e sua perturbação pode levar a fenótipo de filamentação e erros de divisão em Xac (Ucci et al., 2014), que são de fácil identificação. Adicionalmente, o sistema riboswitch (theo/metE) será também utilizado para alterar a expressão do gene amy em Xac, responsável pela produção da proteína ±-amilase que degrada amido. O sucesso desta estratégia permitira o silenciamento de genes essenciais em Xac e de difícil caracterização com métodos de deleção convencionais. (AU)