Caracterização do complexo nucleoproteico interconectando o divisomo e a região terminal de replicação do cromossômica de Xanthomonas citri

• Processo: 24/10539-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2028
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Agronomia - Fitossanidade
• Pesquisador responsável: Henrique Ferreira
• Beneficiário: Natália Alleoni
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Rio Claro. Rio Claro , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/10577-0 - Centro de Pesquisa em Biologia de Bactérias e Bacteriófagos (CEPID B3), AP.CEPID
• Assunto(s): Cancro (doença de planta) Divisão celular Xanthomonas citri Fitopatologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cancro cítrico | Dinâmica cromossômica | Divisão Celular | redes proteícas | Xanthomonas citri | fitopatologia

Resumo

O ciclo celular bacteriano pode ser compreendido como o intervalo entre dois eventossubsequentes de divisão celular. Durante este período, as bactérias devem duplicar seumaterial genético e fazer a segregação dos cromossomos simultaneamente com areplicação de DNA. A divisão, por sua vez, tem início durante os processos dereplicação/segregação e deve ser concluída após a completa partição dos cromossomosrecém-duplicados evitando o guilhotinamento dos mesmos. Desta forma, uma altaorganização dos cromossomos no interior das células influencia suas mobilidades e acorreta partição destes para as células filhas. Várias são as forças que podem operarsegregação de replicons bacterianos e, dentre elas, citamos a compactação de DNA porcondensinas (ex. SMC), a atuação de proteínas de partição (ex. ParABS) e forçasentrópicas, onde polímeros (DNA) sofrem separação em compartimentos cilíndricos comcaracterísticas definidas para maximizar entropia. Além disto, a região terminal dereplicação do cromossomo parece estar envolvida tanto no processo de segregação,quanto no funcionamento do divisomo. Até o momento são conhecidos dois sistemas deorganização do DNA de término de replicação de cromossomos bacterianos: MatP-ZapBZapA de Escherichia coli (E. coli) e ZapT-ZauP-ZapA de Caulobacter crescentus (C.crescentus). MatP e ZapT são proteínas que se ligam ao DNA na região terminal dereplicação dos cromossomos, atuando na sua compactação. Na sequência, este complexonucleoproteico é ancorado ao divisomo via interação com as proteínas ZapB ou ZauP, quepor sua vez se ligam a ZapA (proteína acessória de FtsZ, capaz de ligar e estabilizar oanel-Z). Durante o mestrado da proponente (FAPESP 2022/01768-9), utilizamos coimunoprecipitação para identificar interactantes de GFP-ZapB em Xanthomonas citri (X.citri) e investigar a existência de um provável sistema de organização de DNA de términode replicação nesta bactéria. Dentre as proteínas identificadas citamos AMD14_RS13615,um homólogo de ZapT de C. crescentus, e AMD14_RS08395, uma proteína com funçãodesconhecida. Na corrente proposta, pretendemos estudar a função dos genes quecodificam para estas proteínas utilizando técnicas de deleção/complementação e oudepleção gênica. Realizaremos ensaios de localização subcelular de fusões destasproteínas a GFP e variantes para investigar seus papeis na dinâmica de segregação edivisão celular. Por fim, pretendemos purificar as proteínas AMD14_RS1361 eAMD14_RS08395 para estudos bioquímicos e de interação com seus prováveis DNAsalvo, em ensaios de Chip-seq