Avaliação de mecanismos de modificação pós-translacionais que aumentam a biodisponibilidade do óxido nítrico em vasos de ratas normotensas e espontaneamente hipertensas SHR)ao final da prenhez

Resumo

Estudos prévios de nosso laboratório sugerem que a prenhez seria uma condição fisiológica favorável à redução da pressão arterial, à menor reatividade vascular a estimulação ±1-adrenérgica e ao reestabelecimento da função endotelial em ratas espontaneamente hipertensas (SHR). Ao final da prenhez em SHR, o aumento da produção e/ou a maior biodisponibilidade de NO, consequente do aumento da fosforilação da enzima eNOS via PI3K/Akt, reestabelece a modulação endotélio-eNOS-dependente sobre a reatividade de aortas à fenilefrina (PE). O objetivo deste trabalho será analisar possíveis alterações nos mecanismos de modificação pós-translacionais, que controlam a ativação e/ou aumento de expressão da eNOS, e contribuem para a maior biodisponibilidade de NO observada em vasos de ratas prenhas. Será avaliada a glicosilação da eNOS pela via da hexosamina e as interações proteína-proteína que modulam a fosforilação da atividade da eNOS, em vasos de ratas normotensas (Wistar) e hipertensas (SHR), não prenhas e prenhas. Ensaios de Western Blotting serão realizados para análise da expressão das seguintes proteínas: NOXO1, p47phox, O-GlcNAc transferase, O-GlcNAc, eNOS, p-eNOS, cav-1, p-cav-1, Hsp90, p-Hsp90, calmodulina (CaM), Src, p-Src, Nrf2 e anti-NQO1, bem como as suas interações, por meio da co-imunoprecipitação. Em estudos funcionais, iremos avaliar a participação das proteínas: OGA, pela inibição com PugNAc (100 µmol/L), Hsp90 pela inibição com Geldamycin (1 µmol/L) ou Radicicol (20 nmol/L), e Src por inibição com a droga PP2 (15 µmol/L) na menor reatividade vascular à PE observada em aortas de ratas prenhas. Análise da concentração intracelular das células endoteliais de NO e peróxido de hidrogênio (H2O2) serão analisados por citometria de fluxo. Os resultados serão analisados estatisticamente considerando as variáveis prenhez e hipertensão, por teste de multivariância ANOVA, two-way. Será considerada significativa a diferença quando p<0,05. (AU)