Estudo da função de Ric-8B na ativação de mTOR usando um modelo olfatório

Resumo

In vitro, RIC-8B interage com subunidades ± de proteína G heterotrimérica específicas, atuando tanto como uma chaperona molecular quanto como um fator trocador de nucleotídeos de guanina não-canônico. Trabalhos anteriores do nosso laboratório sugerem que RIC-8B regula a ativação da subunidade G± olfatória, chamada G±olf. G±olf é abundantemente expressa em neurônios olfatórios, onde se acopla a receptores 7-TM específicos e atua na transdução da sinalização de odorantes. Para caracterizar a função de RIC-8B in vivo, produzimos uma linhagem de camundongo mutante para o gene Ric-8B utilizando a estratégia de gene trap. Nossos resultados indicam que RIC-8B é essencial para o desenvolvimento do camundongo e está envolvida no crescimento do embrião e formação do sistema nervoso central embrionário. Através do sequenciamento de transcriptomas de embriões da mesma ninhada, foram identificados os genes diferencialmente expressos entre embrião mutante e embrião selvagem. Esses genes foram posteriormente analisados com o software Ingenuity Pathway Analysis (IPA, Qiagen), e indicaram que as vias canônicas mais significativamente alteradas no embrião mutante estão relacionadas à síntese proteica, tal como a sinalização de mTOR. mTOR é uma serina/treonina quinase presente em dois complexos multiproteicos distintos que são importantes reguladores do metabolismo, crescimento, proliferação e sobrevivência celular. Experimentos de Western blot com lisados de embrião total indicam que a sinalização de mTOR está reduzida em embriões Ric-8B mutantes. Além disso, em células HEK293T, RIC-8B co-imunoprecipita com mTOR e outras proteínas do complexo. Portanto, nossos resultados sugerem que RIC-8B pode estar relacionada à ativação da sinalização de mTOR, possivelmente através de uma proteína G. Interessantemente, publicações recentes mostram que a ativação de neurônios olfatórios por um odorante está associada à fosforilação da proteína ribossomal S6. Fosfo-S6 é um dos produtos mais bem caracterizados da sinalização de mTOR. Dessa maneira, esse projeto tem como objetivo estudar a função de RIC-8B na ativação de mTOR utilizando o modelo de transdução de odorantes, que já está bem estabelecido. (AU)