Efeito do exercício físico sobre a modulação da expressão do receptor ativado por proliferadores de peroxissomos ³ (PPAR³) e da "insulin-degrading enzyme" (IDE) em ilhotas pancreáticas de camundongos

Resumo

Agonistas de PPAR³ são amplamente utilizados no tratamento de DM2, pois aumentam a sensibilidade à insulina. Sabe-se que, nas ilhotas pancreáticas, o PPAR³ modula a secreção de insulina, o estresse oxidativo, o estresse de retículo e também a formação de amiloide. A IDE (insulin-degrading enzyme) é a principal responsável pela degradação de IAPP (islet amyloid polypeptide) e, dessa forma, atua na redução da formação de amiloide. Como o PPAR³ induz a expressão de IDE no tecido neuronal e hepático, inicialmente hipotetizamos que o PPAR³ seja capaz de modular a expressão de IDE em ilhotas e células ² pancreáticas, e que esta enzima possa mediar alguns dos efeitos benéficos do PPAR³ nesse tecido. Além disso, o exercício físico, recomendado para pacientes com DM2, modula a expressão de PPAR³ em diversos tecidos. Portanto, nossa segunda hipótese é que o treinamento físico seja capaz de interferir na expressão de PPAR³ nas ilhotas pancreáticas, possivelmente, alterando a expressão de IDE neste modelo. Para testar nossa hipótese inicial, ilhotas pancreáticas de camundongos C57BL6 e células ² da linhagem INS1E, serão distribuídas nos seguintes grupos: um grupo controle (CTL) e um grupo tratado com rosiglitazona, um agonista de PPAR³ (RZG). Após o tratamento, será avaliada a expressão de IDE nessas ilhotas. Confirmado a modulação de PPAR³ sobre a expressão de IDE, estudaremos se a IDE medeia alguns efeitos do PPAR³ e, para isso, utilizando os mesmos tecidos, formaremos os seguintes grupos: CTL, RZG e um grupo tratado com rosiglitazona mais ML345, um inibidor da IDE (RZG+ML). Será avaliado: secreção de insulina, sobrevivência das células insulares, degradação de IAPP e, formação de amiloide. Para averiguar se o exercício físico controla a expressão do PPAR³, camundongos serão distribuídos em dois grupos: controle (CTL) e treinado em esteira por 2 meses (TRE). Após esse período, todos os camundongos serão eutanasiados para o isolamento das ilhotas pancreáticas através da digestão do pâncreas com colagenase. Essas ilhotas serão distribuídas nos seguintes grupos: controle (CTL), treinado (TRE) e treinado tratado com GW9662, um antagonista de PPAR³ (TRE+GW). Serão avaliados a secreção de insulina, sobrevivência das células insulares, degradação de IAPP, formação de amiloide e expressão gênica (Real-time RT-PCR) e proteica (Western blot) de PPAR³ e IDE (AU)