Potencial de utilização de células pós-editadas no gene TFAM pela tecnologia CRISPR Cas 9 em modelo bovino

Resumo

O fator de transcrição A mitocondrial (TFAM) é um membro da subfamília HMGB que se liga a promotores do DNA mitocondrial (mtDNA). É um gene importante para a manutenção do mtDNA, pois regula o número de cópias e é essencial para inicialização da replicação e transcrição do mtDNA. Recentemente técnicas de edição gênica vêm sendo utilizada como uma ferramenta bastante eficaz na manipulação genômica. A nova tecnologia chamada de CRISPR/ Cas9 (regulary interspaced clustered short palindromic repeats) utiliza um RNA guia (gRNA) curto que contém 20 nucleotídeos complementares a sequência de DNA. Quando o RNA guia se liga ao local alvo, a proteína Cas9 é recrutada para se ligar no local alvo e induzir a dupla quebra na cadeia de DNA. Neste contexto, editamos o gene TFAM em fibroblastos bovinos pela tecnologia CRISPR Cas9, justamente por este gene regular a especificidade de replicação do mtDNA, consequentemente visando gerar uma célula depletada quanto à replicação mitocondrial. Desta forma, esta proposta tem como objetivo analisar a capacidade de manutenção das células pós-editadas em cultura e sua funcionalidade, ou seja, a caracterização da quantidade de número de cópias mitocondriais, análise do potencial de membrana e viabilidade de manutenção do cultivo in vitro. A presente proposta permitirá a expansão de pesquisas ainda carentes de estudos mais profundos, permitindo a confirmação da geração de um novo modelo de estudo de herança e segregação mitocondrial. (AU)