Um novo ensaio de atividade da dissulfeto isomerase proteica no plasma humano

Resumo

A Dissulfeto Isomerase Proteica (PDI) é uma chaperona oxiredutase ditiol-dissulfeto da superfamília tiorredoxina que catalisa a formação e isomerização de pontes dissulfeto como um componente funcional essencial da síntese e processamento de proteínas. Apesar de se localizar primariamente no retículo endoplasmático, a PDI tem sido relatada em outras regiões intracelulares e na superfície celular. A PDI é secretada por diversos tipos celulares e possui um papel de grande relevância em vários processos biológicos, como a formação de trombos após lesão vascular, atividade de plaquetas, e no remodelamento vascular. Alguns estudos têm demonstrado o papel da PDI como tiol redutase na ativação de proteínas plasmáticas envolvidas no processo trombogênico, tornando a PDI um importante e inovador alvo antitrombótico. No entanto, a existência de PDI circulante em condições normais é controversa e sua existência tem sido inclusive questionada. Imunoensaios realizados em nosso grupo dão suporte robusto à presença de concentrações nanomolares de PDI em indivíduos saudáveis, bem como em pacientes. No entanto, a atividade da PDI plasmática não foi quantificada até o momento. O objetivo deste estudo é desenvolver um ensaio para medir a atividade tiol redutase da PDI no plasma, adaptando metodologia já validada em outros sistemas. Para isto, utilizaremos a sonda fluorescente di-Eosina-GSSG, já caracterizada para a mensuração da atividade tiol redutase da PDI em concentrações nanomolares. O principal desafio será refinar o ensaio para a mensuração da atividade tiol redutase da PDI em concentrações relativamente baixas. A validação destes ensaios deverá contribuir com uma nova ferramenta para investigar o papel fisiológico e patológico da PDI na fração plasmática em diversas condições. (AU)