Construção de uma cepa de S. cerevisiae, pelo sistema CRISPR/Cas9, capaz de expressar uma LPMO, visando o melhoramento da sacarificação de biomassas lignocelulósicas

Resumo

Os impactos ambientais decorrentes da liberação de gases de efeito estufa têm estimulado muitos esforços visando a substituição dos combustíveis fósseis por biocombustíveis. Nesse sentido, as biomassas lignocelulósicas renováveis são uma excelente alternativa, pois são constituídas principalmente de celulose e hemicelulose que após hidrólise por CAZymes (Carbohydrate-Active Enzymes) podem ser convertidos em açúcares fermentáveis, sendo esse um dos maiores gargalos na produção de biocombustíveis. Com isso, a busca por novas enzimas capazes de aumentar a eficiência e baixar os custos dos processos de hidrólise tem sido alvo de muitos pesquisadores. Nesse cenário, análises de transcriptoma e secretoma do fungo A. fumigatus crescido na presença de bagaço de cana-de-açúcar explodido (SEB), realizadas em nosso laboratório (2014/10466-0), revelaram a produção de importantes enzimas, dentre elas as mono-oxigenase lítica de polissacarídeo (LPMOs). As LPMOs apresentam um mecanismo de oxidorredução sob-regiões cristalinas da matriz polissacarídica favorecendo a ação de enzimas como as GHs. Desta forma, os objetivos desse projeto são a super-expressão de uma LPMO de A. fumigatus em cepa de S. cerevisiae, pela técnica de CRISPR/cas9, visando um processo de sacarificação da celulose mais eficiente além de permitir a melhor caracterização das LPMOs quanto à atividade durante a suplementação de coquetéis enzimáticos disponíveis comercialmente. Os resultados desse projeto irão auxiliar os objetivos propostos pelo projeto em desenvolvimento no nosso laboratório (Projeto Fapesp:2016/190950). (AU)