Efeito da inibição dos receptores de fator de crescimento fibroblástico na diferenciação do endoderma primitivo em embriões bovinos produzidos in vitro

Resumo

A segregação das linhagens celulares e a implantação do embrião são eventos definitivos para o sucesso da gestação. As primeiras divisões celulares resultam na divisão entre trofectoderma (TE) e massa interna celular (MCI). Na sequência, a MCI é diferenciada em epiblasto (EPI) e endoderma primitivo (PE). Sabe-se que, em embriões murinos, o fator de transcrição NANOG promove a secreção de fator de crescimento fibroblástico (FGF) o qual ativa receptores de FGF (FGFR) e subsequentemente a via MEK/ERK. Este mecanismo leva à diferenciação de células de MCI em células de PE. Estudos recentes sugerem que a inibição da via MEK/ERK reduz número de células do PE em embriões bovinos. A hipótese deste projeto é que a sinalização por receptores de FGF não interfere na especificação do PE em embriões bovinos. O objetivo do estudo é avaliar o papel da sinalização por FGF na especificação do EPI e do PE em embriões bovinos por meio da inibição farmacológica do FGFR. Embriões bovinos produzidos in vitro serão tratados com inibidor de FGFR AZD4547 em diferentes momentos do desenvolvimento: dia 5 ao dia 7 após a fertilização in vitro, dia 7 ao dia 9, o terceiro do dia 5 ao dia 9. Também haverá um grupo controle não-tratado, e outro tratado com DMSO. Os blastocistos serão fixados em paraformaldeído para realização de imunofluorescência, visando verificar as células que expressam GATA6, NANOG e SOX17 em microscopia confocal. Espera-se com este trabalho compreender melhor o papel da via de sinalização do FGF na segregação de EPI e PE.