Perfil de expressão de marcadores germinativos, epigenéticos e de pluripotência em células germinativas masculinas e femininas durante os períodos de desenvolvimento embrionário e adulto em suínos

Resumo

As células germinativas primordiais (PGCs), são as células percursoras dos gametas masculinoe feminino, por esta razão são as únicas células do corpo capazes de gerar um novo indivíduo.Estas células na maioria dos animais e inclusive em suínos, surgem próximas a regiãoepiblástica e deste local deslocam-se em direção ao intestino primitivo do embrião, por meiode movimentos morfogênicos e sinais extrínsecos, seguindo rumo à parede corporal posteriore acomodando-se no mesênquima gonadal, onde induzem a diferenciação das célulasadjacentes que irão formar as futuras gônadas. Nos animais domésticos e silvestres assim comoem suínos, há poucas pesquisas referentes ao perfil das PGCs in vivo e in vitro. Nestes animais,estudos recentes mostram a expressão de diversos marcadores durante o período inicial dodesenvolvimento (9-15.5 dias) e a análise dos níveis de metilação da PGCs durante os dias 24e 31 da gestação, porém pouco se sabe sobre o perfil fenotípico e alterações epigenéticas dasPGCs em períodos gestacionais mais tardios e fase adulta, sejam em machos ou fêmeas. Osuíno é considerado um modelo translacional em diversas áreas da medicina, por ser umaespécie com metabolismo, fisiologia e anatomia similares ao dos humanos, sendo, portanto,largamente utilizados como modelo de doenças, além de apresentarem curto período degestação, o que torna a espécie ainda mais favorável a pesquisa com embriões e PGCs.Portanto, dado a importância e a complexidade das células germinativas primordiais para aformação e reprodução de um indivíduo, o entendimento dos mecanismos e vias de migraçãoe diferenciação das PGCs, bem como a compreensão das diferenças entre machos e fêmeastorna-se essencial. De tal maneira, este estudo tem como objetivo analisar a expressão demarcadores epigenéticos e às várias proteínas associadas ao desenvolvimento e diferenciaçãodas PGCs em suínos do sexo feminino e masculino, desde o início do desenvolvimentoembrionário até a fase adulta, a fim de compreender as diferentes expressões gênicas entre ossexos. Para isto, serão coletadas amostras em diferentes períodos gestacionais (de 22 a 40 diaspós fertilização), testículos e ovários de suínos adultos. Todas as amostras serão analisadasquanto a expressão dos marcadores germinativos, pluripotentes e epigenéticos (POU5F1,DDX4, DAZL, STRA8, STELLA, PLZF, SOX2, 5hmC, 5mC, H3K27me3 e H3K9me2), pormeio de histologia, imunofluorescência e de RT-qPCR. Os resultados obtidos neste estudopoderão auxiliar no entendimento das vias de reprogramação sofridas pelas PGCs suínasdurante o desenvolvimento e amadurecimento reprodutivo, bem como agregar conhecimentosobre as PGCs in vivo de machos e fêmeas, que poderão ser transpostos para a geração degametas maduros in vitro e viáveis e serem utilizados na biotecnologia da reprodução deanimais domésticos e como modelo de estudos em humanos.