Perfil de expressão de marcadores germinativos, epigenéticos e de pluripotência em células germinativas masculinas e femininas durante os períodos de desenvolvimento embrionário e adultos em suínos

Resumo

As células germinativas primordiais (PGCs), são as células percursoras dos gametas masculino e feminino, por esta razão são as únicas células do corpo capazes de gerar um novo indivíduo. Estas células na maioria dos animais e inclusive em suínos, surgem próximas a região epiblástica e deste local deslocam-se em direção ao intestino primitivo do embrião, por meio de movimentos morfogênicos e sinais extrínsecos, seguindo rumo à parede corporal posterior e acomodando-se no mesênquima gonadal, onde induzem a diferenciação das células adjacentes que irão formar as futuras gônadas. Nos animais domésticos e silvestres assim como em suínos, há poucas pesquisas referentes ao perfil das PGCs in vivo e in vitro. Nestes animais, estudos recentes mostram a expressão de diversos marcadores durante o período inicial do desenvolvimento (9-15.5 dias) e a análise dos níveis de metilação da PGCs durante os dias 24 e 31 da gestação, porém pouco se sabe sobre o perfil fenotípico e alterações epigenéticas dasPGCs em períodos gestacionais mais tardios e fase adulta, sejam em machos ou fêmeas. O suíno é considerado um modelo translacional em diversas áreas da medicina, por ser uma espécie com metabolismo, fisiologia e anatomia similares ao dos humanos, sendo, portanto, largamente utilizados como modelo de doenças, além de apresentarem curto período de gestação, o que torna a espécie ainda mais favorável a pesquisa com embriões e PGCs. Portanto, dado a importância e a complexidade das células germinativas primordiais para a formação e reprodução de um indivíduo, o entendimento dos mecanismos e vias de migração e diferenciação das PGCs, bem como a compreensão das diferenças entre machos e fêmeas torna-se essencial. De tal maneira, este estudo tem como objetivo analisar a expressão de marcadores epigenéticos e às várias proteínas associadas ao desenvolvimento e diferenciação das PGCs em suínos do sexo feminino e masculino, desde o início do desenvolvimento embrionário até a fase adulta, a fim de compreender as diferentes expressões gênicas entre os sexos. Para isto, serão coletadas amostras em diferentes períodos gestacionais (de 22 a 40 dias pós fertilização), testículos e ovários de suínos adultos. Todas as amostras serão analisadas quanto a expressão dos marcadores germinativos, pluripotentes e epigenéticos (POU5F1,DDX4, DAZL, STRA8, STELLA, PLZF, SOX2, 5hmC, 5mC, H3K27me3 e H3K9me2), por meio de histologia, imunofluorescência e de RT-qPCR. Os resultados obtidos neste estudo poderão auxiliar no entendimento das vias de reprogramação sofridas pelas PGCs suínas durante o desenvolvimento e amadurecimento reprodutivo, bem como agregar conhecimento sobre as PGCs in vivo de machos e fêmeas, que poderão ser transpostos para a geração de gametas maduros in vitro e viáveis e serem utilizados na biotecnologia da reprodução de animais domésticos e como modelo de estudos em humanos.