Influência da terapia fotodinâmica combinada com peptídeos antimicrobianos sobre biofilmes de Candida albicans e cultura 3D de células

Resumo

A resistência antifúngica a fármacos convencionais é uma dificuldade no controle das infecções fúngicas. Nesse contexto, a terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT) vem sendo investigada para o controle dos biofilmes de Candida albicans, com intuito de inativar as células microbianas e fragilizar a Matriz Extracelular (MEC). O Photodithazine (PDZ) e um fotossensibilizador (FS) de segunda geração derivado da clorina e6 que tem sido empregado na inativac'ao fotodinamica com resultados promissores. Os Peptídeos Antimicrobianos (PAMs) também se destacam no controle da disseminação de infecção, principalmente por serem de aplicação local e apresentarem atuação em múltiplos alvos celulares, semelhante à aPDT. Para desenvolver um protocolo para potencializar a ação da aPDT, o objetivo deste trabalho será investigar o efeito da aPDT mediada por PDZ combinada com PAM(s) sobre biofilme de C. albicans susceptível (ATCC 90028; CaS) e resistente ao fluconazol, (ATCC 96901; CaR) e cultura 3D de células (NOK-si e FGH). Os objetivos específicos serão: 1- análise da eficácia antimicrobiana e mecanismo de ação dos PAMs sobre culturas planctônicas e biofilmes de CaS e CaR e sua biocompatibilidade sobre células humanas (NOK-si e FGH); 2- avaliar o efeito da aPDT (mediada pelo PDZ associada a luz LED) com e sem combinação do(s) PAM(s) sobre biofilmes de CaS e CaR e sua MEC; 3- análise da expressão gênica das células de C. albicans sobreviventes aos tratamentos de aPDT (mediada pelo PDZ associada a luz LED) combinado ao(s) PAM(s); 4- avaliar o efeito da aPDT (mediada pelo PDZ associada a luz LED) combinado ao(s) PAM(s) sobre células humanas (NOK-si e FGH) em um modelo de co-cultivo 3D infectado por C. albicans (CaS e CaR). Todos os experimentos serão realizados em quadruplicata, em 3 ocasiões distintas (n=12). O teste estatístico mais adequado será aplicado respeitando os pressupostos estabelecidos no delineamento experimental, considerando um nível de significância de 5%. (AU)