Resposta integrada de estresse mitocondrial e a regulação do processamento de pró-opiomelanocortina em linhagens de células neuronais hipotalâmicas

Resumo

Ácidos graxos saturados, tais como palmitato, são importantes componentes da dieta que induzem distúrbios funcionais e estruturais de neurônios anorexigênicos hipotalâmicos POMC, gerando inicialmente defeitos na regulação de enzimas que processam a proopiomelanocortina e posteriormente levando à inflamação hipotalâmica. Demonstrou-se recentemente que estresse celular provocado pela deleção de CRIF1 leva à ativação da resposta mitocondrial de proteínas mal enoveladas (UPRmt, do inglês, mitochondrial unfolded protein response) promovendo alteração do processamento enzimático de POMC e predispondo ao desenvolvimento da obesidade. Entretanto, não foi completamente elucidado se a UPRmt afeta as peptidases que processam POMC. Neste estudo, utilizaremos linhagens de neurônios hipotalâmicos que expressam POMC para avaliar se o estresse celular induzido por palmitato é capaz de afetar o processamento de POMC por meio de UPRmt e regulação anômala das enzimas PC1/3 e PC2. As linhagens serão expostas a uma concentração de palmitato capaz de induzir alteração na expressão das peptidases e a UPRmt será avaliada através da mensuração da expressão de marcadores do fenômeno, assim como por ensaios funcionais de respiração mitocondrial. Numa segunda etapa, a comunicação entre UPRmt e regulação da expressão gênica no núcleo será interrompida por meio da inibição do sistema CRIF1/MOTS-c utilizando um siRNA contra CRIF1. O impacto da ruptura da comunicação entre mitocôndria e núcleo sobre o processamento de POMC será avaliado através da mensuração de PC1/3, PC2 e dos subprodutos alfa-MSH e beta-endorfina. Acreditamos que a elucidação dos mecanismos por meio dos quais os ácidos graxos saturados presentes na dieta afetam a função de neurônios POMC, bem como as alterações de CRIF1, contribuirão para avanços na caracterização da patofisiologia neural da obesidade.