Estabelecimento de bioprocessos escalonáveis para produção de partículas semelhantes a vírus

Resumo

A tecnologia de produção de vacinas através de partículas-semelhantes a vírus (VLP) vem se estabelecendo comercialmente. Estas nanoestruturas compostas por proteínas virais são mais seguras que as vacinas tradicionais (vírus atenuado e inativado) e mais imunogênicas que as de subunidades. Entre as plataformas de produção de VLP, o sistema baculovírus/célula de inseto (B/IC) tem uma posição de destaque. Duas estratégias de expressão viral para gerar VLP complexas são viáveis com o B/IC: infecção com múltiplos baculovírus monocistrônicos (coinfecção) e infecção com um único baculovírus policistrônico (coexpressão). As VLP pelo B/IC são usualmente produzidas em biorreatores tipo tanque com agitação mecânica e aeração (STB), para posteriormente serem purificadas dependendo da escala, através de centrifugação por gradiente de densidade (laboratório) ou técnicas cromatográficas (comercial) principalmente. Em cada uma destas etapas múltiplos parâmetros operacionais devem ser otimizados inicialmente na escala laboratorial em equipamentos semelhantes aos utilizados na escala comercial, para assim obter bioprocessos que possam ser escalonados até a implementação industrial. Desta forma, o objetivo desta proposta será otimizar as condições de agitação e aeração, modo de operação (batelada, batelada alimentada) em STB, assim como as condições cromatográficas (sistema de tampões, volume de amostra/volume de coluna, velocidade linear) nos processos de propagação de baculovírus recombinantes e na produção de VLP, utilizando como modelos, o vírus rábico, o vírus Zika e o SARS-CoV-2, agentes etiológicos da raiva (uma doença negligenciada), doença causa pelo vírus Zika e da COVID-19, respectivamente. Finalmente as VLP purificadas e caracterizadas serão avaliadas imunologicamente por técnicas in vitro de modo que seja reduzido o uso de animais de laboratório e possam ser validados os bioprocessos propostos. Se estas metas forem atingidas com sucesso, poderão ser transferidos bioprocessos robustos para etapas posteriores de desenvolvimento com rendimentos e produtividades otimizadas, assim como produtos associados com atividade biológica comprovada preliminarmente. Os resultados desta proposta permitiriam também implementar uma plataforma escalonável de produção de VLP para diferentes doenças virais conhecidas e por conhecer. (AU)