Interação interespecífica e mecanismos de absorção de vesículas extracelulares com tropismo para células B

Resumo

Vesículas extracelulares (EVs) são partículas em nano-escala secretadas por células, que oferecem transporte e armazenamento estável para biomoléculas. Sua estrutura permite sua absorção por outras células, o que torna EVs candidatos potenciais para novas abordagens terapêuticas, particularmente na distribuição de fármacos. Para determinar como EVs atuam em uma abordagem terapêutica, torna-se necessário compreender melhor os mecanismos de organização de carga, processos de interação, dosagem, forma de administração e origem vesicular. Resultados prévios do Laboratório Witwer identificaram um grande envolvimento de leucócitos na depuração de EVs humanas no sangue de primatas não-humanos, com ênfase particular em células B, cuja ação é crítica à resposta imune e expressão de anticorpos. Células B também realizam a manutenção da homeostase, ativação de órgãos linfáticos secundários, desenvolvimento de células T CD4+ e de respostas imunes inflamatórias. EVs são importantes moduladores do sistema imune, auxiliando no transporte de citocinas e fatores de crescimento, apresentação de antígenos e efeitos pleiotrópicos no sistema complemento e na coagulação - majoritariamente devido a sinalização de miRNA. Neste projeto, almejamos compreender os mecanismos moleculares do tropismo de EVs para células B in vitro. Para testar nossa hipótese, pretendemos separar EVs de células em cultura utilizando ultracentrifugação diferencial, em conjunto com filtração e SEC, e posteriormente caracterizá-las conforme as indicações do MISEV2018. Ensaios de interação serão realizados com células de cultura primária de primatas (humanos e não-humanos) por citometria de fluxo de imagem e análise de microscopia confocal. Também sugerimos a utilização de RNAseq e stem-loop RT-qPCR para identificar perfis de miRNA que possam explicar o tropismo de EVs às células B. (AU)