Entendendo os mecanismos de transporte nuclear das subunidades do exossomo de RNA em Saccharomyces cerevisiae

Resumo

O exossomo é um complexo multiproteico que desempenha um papel importante no processamento e degradação de todas as classes de RNAs no núcleo e no citoplasma. Nas células de Saccharomyces cerevisiae, é formado por 10 subunidades no citosol (EXO10) e por 11 subunidades no núcleo (EXO11). No citosol, o EXO10 atua na regulação de níveis específicos de expressão de mRNA associados ao complexo Ski, enquanto no núcleo o EXO11 atua na maturação de vários RNAs e degradação de pré-mRNAs instáveis. No núcleo, o exossomo está altamente concentrado no nucléolo, onde participa do processamento do rRNA, mais especificamente da maturação do 5.8 S rRNA e degradação do espaçador 5'-ETS. O mecanismo responsável pelo transporte do exossomo ao núcleo e seu direcionamento ao nucléolo ainda é desconhecido. Para entender melhor a importação nuclear desse complexo, nosso grupo de pesquisa estudou o transporte das subunidades catalíticas (Rrp6 e Rrp44). As subunidades catalíticas contêm sequências de localização nuclear (NLS) e as importinas Kap95 (importina ²) e Srp1 (Importina ±) são as principais envolvidas no transporte nuclear dessas subunidades. Neste trabalho, propomos estudar o transporte de proteínas do core do exossomo (6 subunidades) e proteínas cap do exossomo (3 subunidades). A experiência do Dr. Gadal no uso de microscopia de alta resolução para estudar a transcrição do rRNA e a localização de proteínas nucleolares em leveduras nos ajudará a determinar a localização das subunidades do exossomo em mutantes de carioferina e identificar quais das subunidades centrais do complexo são responsáveis por sua importação nuclear. (AU)