Manipulação da via Wnt/b-catenina durante a MIV de oócitos suínos visando a produção de clones por TNCS

Resumo

Os suínos são utilizados como modelo experimental em pesquisas biomédicas desde a Grécia Antiga, principalmente devido a semelhança fisiológica, anatômica e genética com os humanos.Estudos com modelos suínos transgênicos são realizados com objetivo de promover avanço sna pesquisa científica, mediante ao uso de duas ferramentas, como a CrispR-Cas9 e produção in vitro (PIV) de embriões clones por meio transferência nuclear de células somáticas (TNCS). A etapa de maturação in vitro (MIV) oocitária é uma etapa fundamental para a PIV e requer uma série de complexos eventos nucleares, citoplasmáticos e moleculares. Desta forma, estudos durante a etapa MIV podem contribuir para a PIV de embriões clones suínos. Estudos com a manipulação da via Wnt/²-catenina durante a MIV, por meio da R-spondina 2 (RSPO2) ou da proteína 1 relacionada a Dickkopf (DKK1), demonstraram aprimorar a maturação oocitária e odesenvolvimento dos embriões. Assim o objetivo do presente estudo será avaliar os efeitos da associação da suplementação dos oócitos suínos com RSPO2 e DKK1 durante a MIV, visando a produção de partenotos e embriões clones (Mini-pigs e Onco-pigs) por meio de TNCS. A manipulação da via Wnt/²-catenina será realizada por meio da suplementação de RSPO2 eDKK1 aos meios de MIV, onde serão estabelecidos 10 grupos: Controle (CTL/CTL), ControleNegativo (CTL Sem PFF/ CTL Sem PFF), A (DKK1/DKK1), B (RSPO2/RSPO2), C(DKK1/RSPO2) e D (RSPO2/DKK1), E (CTL/DKK1), F (DKK1/CTL), G (CTL/RSPO2), e H(RSPO2/ CTL). Os oócitos maturados serão ativados por partenogênese e as taxas de maturaçãoserão avaliadas, assim como a ativação e desenvolvimento dos blastocistos. O tratamento com melhores taxas será eleito para a clonagem, os embriões produzidos serão transferidos para fêmeas adultas sincronizadas, eventuais gestações serão acompanhadas até o parto e sua prole avaliada. Os resultados de dados binários serão analisados a partir do teste Qui-quadrado e os demais por ANOVA. (AU)