Constituição do complexo ribonucleoprotéico telomerase em linhagens de Leishmania major e Leishmania infantum com diferentes background genéticos

Resumo

As leishmanioses são doenças crônicas causadas por protozoários flagelados do gênero Leishmania, os quais são transmitidos ao homem pela picada de insetos fêmeas infectados. A leishmaniose é tratada principalmente pela administração de antimoniais pentavalentes, embora eles sejam altamente tóxicos e não completamente efetivos. Portanto, para controlar a doença é necessário que se encontrem novos fármacos que alvejem vias parasito-específicas. Recentemente, os telômeros e a telomerase dos parasitas tem sido considerados alvos emergentes em potencial para o desenvolvimento de fármacos. A atividade de telomerase foi demonstrada em Leishmania, assim como os componentes básicos TERT (telomerase reverse transcriptase) e TER (telomerase RNA) foram identificados e caracterizados. Entretanto, a composição exata do complexo holoenzimático ainda não é conhecida. Neste trabalho pretendemos identificar novos componentes do complexo telomerase de Leishmania e suas interações cruciais requeridas para sua montagem. Resultados preliminares do nosso grupo demonstram que o ortólogo de Hsp90 do parasita, Hsp83, forma um complexo com a telomerase e provavelmente auxilia manter a homeostase telomérica, sendo considerado um integrante do complexo telomerase RNP. Neste projeto pretendemos identificar novos componentes do complexo telomerase em linhagens de L. major e L. infantum com diferentes background genéticos (por ex. selvagem, nocaute e superexpressor) usando co-imunoprecipitação, cromatografia de afinidade e análise proteômica por espectrometria de massa. Preliminarmente, candidatos a interatores do complexo telomerase serão validados usando soro-imune específico para imunolocalização subcelular e co-imunoprecipitação com a TERT e o componente TER nas diferentes fases de desenvolvimento dos parasitos. A identificação dessas proteínas trará com certeza uma compreensão mais aprofundada sobre a biogênese da telomerase de Leishmania e auxiliará a montar a rede de interações entre o complexo RNP e os telômeros do parasito. (AU)