Investigação da relação estrutura-função das proteínas RPAP3, Pih1D1, WDR92 de Aedes aegypti e seu papel no desenvolvimento do inseto

Resumo

O complexo R2TP (Rvb1-Rvb2-Tah1/RPAP3-Pih1/Pih1D1) está envolvido na montagem e estabilização de complexos macromoleculares associados a várias vias essenciais para o crescimento e proliferação celular. Mais especificamente, uma das proteínas componentes deste complexo, RPAP3, mostrou ser essencial para o desenvolvimento e sobrevivência das larvas da mosca-da-fruta Drosophila melanogaster. Curiosamente, essa proteína não é essencial para leveduras e humanos, o que sugere uma segurança biológica para sua utilização como alvo molecular no controle do mosquito, vetor de doenças tão importantes no contexto nacional. No presente projeto, pretendemos caracterizar estrutural e funcionalmente as proteínas RPAP3, Pih1D1 e WDR92 de Aedes aegypti, para lançar luz sobre suas conformações e funções. Visando avaliar a importância destas proteínas para o desenvolvimento e sobrevivência do mosquito, realizaremos análise da expressão gênica espacial (in situ) e relativa (qRT-PCR) em todos os estágios do desenvolvimento, bem como experimentos de silenciamento gênico por RNA de interferência e deleção por CRISPR/Cas9 dos genes rpap3, pih1d1 e wdr92. Almejamos, ainda, identificar a formação do complexo R2TP in vivo por meio da co-localização das proteínas em cortes histológicos do mosquito. Finalmente, esperamos identificar compostos que interajam com RPAP3, Pih1D1 e WDR92, desestabilizando essas proteínas e, portanto, podendo ser potenciais candidatos a compostos para inibição do desenvolvimento do mosquito ainda em estágio larval. Espera-se que o presente projeto gere pelo menos duas publicações em revistas indexadas e contribua para o desenvolvimento de um produto com potencial comercial para o controle deste vetor. (AU)