Avaliação lipidômica, de expressão gênica e de criotolerância em embriões bovinos cultivados in vitro com lipossomos

Resumo

A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos representa uma biotecnologia crucial para a reprodução e melhoramento genético de rebanhos, dada a importância econômica global da pecuária. No entanto, apesar do crescente interesse e investimento nesse campo, a PIVE ainda enfrenta desafios significativos, como a baixa taxa de produção e a qualidade dos embriões, que ainda são distintos daqueles derivados in vivo. O objetivo, com este projeto de pesquisa, é investigar os processos de interação de vesículas lipídicas sintéticas, que podem atuar como carreadoras de moléculas e hormônios sinalizadores, presentes no ambiente materno, para o desenvolvimento embrionário. Assim, serão estudados três modelos de vesículas com tamanho (grande ou pequeno) e configuração lamelar (uni ou multilamelares) distintas. Após padronização da formação e avaliação de sua estabilidade em condições de incubação embrionárias (0, 24 e 48 horas, por espalhamento dinâmico de luz), as vesículas serão co-cultivadas com embriões a partir do D5 (dias pós-inseminação, sendo o dia da FIV o D0). A taxa de blastocisto e de eclosão (D7 a D9) será um indicativo morfológico de eventual toxicidade, bem como a análise de expressão gênica em amostras dos grupos controle e tratados. Serão testadas diferentes composições lipídicas (fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfoinositídeo e colesterol) e concentrações (2, 4 e 6 mmol/L) para cada tipo de vesícula. Por fim, serão realizadas análises de lipidômica (MRM profiling), de criotolerância (vitrificação e posterior aquecimento para detectar as taxas de expansão e de eclosão) e de expressão gênica (plataforma Biomark HD, com um amplo painel gênico) nos embriões produzidos com as mais promissoras vesículas. As descobertas não apenas fornecerão insights valiosos sobre a interação entre as vesículas e os embriões, como também orientarão futuras pesquisas e aplicações práticas na área da reprodução assistida em bovinos - como a mudança de lipídeos em sua composição ou a incorporação, nas vesículas, de proteínas ou de moléculas sinalizadoras não lipídicas.