Violeta de Metileno 3RAX na Terapia Fotodinâmica do Melanoma (A375 e SH-4): Avaliação em Esferoides 3D

Resumo

O melanoma é a forma mais letal de câncer de pele e demanda terapias maisseletivas e eficazes. Este projeto avaliará a terapia fotodinâmica mediada pelofotossensibilizador (FS) violeta de metileno 3RAX (VM-3RAX) em modelos demelanoma humano, com ênfase em eficácia e mecanismos de ação. Partindo deevidências em culturas bidimensionais de baixa toxicidade no escuro e fortefototoxicidade, avançaremos para esferoides tridimensionais das linhagens A375 e SH-4.Os esferoides serão formados em placas de ultra-baixa aderência até ~450 µm esubmetidos a protocolos padronizados de fotossensibilização e irradiação em LED de 525nm, permitindo a comparação direta entre os sistemas 2D e 3D quanto à dosimetria, àpenetração e distribuição do FS e à geração de espécies reativas de oxigênio. A respostaterapêutica será quantificada por volume do esferoide, viabilidade por marcadoresfluorescentes (Calcein Blue AM e Sytox Green), peroxidação lipídica com C11-BODIPY,análise de morte celular por citometria de fluxo com Annexin-V Alexa Fluor 647/ SytoxGreen e liberação de LDH. A caracterização óptica incluirá microscopia confocal, alémde mapeamento de hipóxia em esferoides. Espera-se, como entregáveis, protocolosreprodutíveis para formação e análise de esferoides, parâmetros operacionais para uso doVM-3RAX em TFD e um quadro mecanístico que explique diferenças entre 2D e 3D,resultando em manuscritos para periódicos especializados. Embora estudos in vivo nãosejam objetivo central, os resultados devem fornecer base para propor e iniciar, em etapasubsequente, um modelo animal inicial, ampliando a relevância translacional do trabalho. (AU)