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(Referência obtida automaticamente do Web of Science, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores.)

Real-Time PCR Quantification of Heteroplasmy in a Mouse Model with Mitochondrial DNA of C57BL/6 and NZB/BINJ Strains

Texto completo
Autor(es):
Machado, Thiago Simoes [1, 2, 3] ; Macabelli, Carolina Habermann [1, 3] ; Sangalli, Juliano Rodrigues [2, 3] ; Rodrigues, Thiago Bittencourt [1] ; Smith, Lawrence Charles [4, 2] ; Meirelles, Flavio Vieira [2, 3] ; Chiaratti, Marcos Roberto [1, 2, 3]
Número total de Autores: 7
Afiliação do(s) autor(es):
[1] Univ Fed Sao Carlos, Ctr Ciencias Biol & Saude, Dept Genet & Evolucao, BR-13565905 Sao Carlos, SP - Brazil
[2] Univ Sao Paulo, Fac Med Vet & Zootecnia, Dept Cirurgia, BR-05508270 Sao Paulo, SP - Brazil
[3] Univ Sao Paulo, Fac Zootecnia & Engn Alimentos, Dept Med Vet, BR-13635900 Pirassununga, SP - Brazil
[4] Univ Montreal, Fac Med Vet, Ctr Rech Reprod Anim, St Hyacinthe, PQ J2S 7C6 - Canada
Número total de Afiliações: 4
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: PLoS One; v. 10, n. 8 AUG 14 2015.
Citações Web of Science: 5
Resumo

Mouse models are widely employed to study mitochondrial inheritance, which have implications to several human diseases caused by mutations in the mitochondrial genome (mtDNA). These mouse models take advantage of polymorphisms between the mtDNA of the NZB/BINJ and the mtDNA of common inbred laboratory (i.e., C57BL/6) strains to generate mice with two mtDNA haplotypes (heteroplasmy). Based on PCR followed by restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP), these studies determine the level of heteroplasmy across generations and in different cell types aiming to understand the mechanisms underlying mitochondrial inheritance. However, PCR-RFLP is a time-consuming method of low sensitivity and accuracy that dependents on the use of restriction enzyme digestions. A more robust method to measure heteroplasmy has been provided by the use of real-time quantitative PCR (qPCR) based on allelic refractory mutation detection system (ARMS-qPCR). Herein, we report an ARMS-qPCR assay for quantification of heteroplasmy using heteroplasmic mice with mtDNA of NZB/BINJ and C57BL/6 origin. Heteroplasmy and mtDNA copy number were estimated in germline and somatic tissues, providing evidence of the reliability of the approach. Furthermore, it enabled single-step quantification of heteroplasmy, with sensitivity to detect as low as 0.1% of either NZB/BINJ or C57BL/6 mtDNA. These findings are relevant as the ARMS-qPCR assay reported here is fully compatible with similar heteroplasmic mouse models used to study mitochondrial inheritance in mammals. (AU)

Processo FAPESP: 10/09561-7 - Efeito da introdução de uma grande quantidade de mitocôndrias embrionárias ou somáticas sobre o desenvolvimento e a herança mitocondrial em bovinos
Beneficiário:Marcos Roberto Chiaratti
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
Processo FAPESP: 13/23408-5 - Bases moleculares da herança mitocondrial: o papel da fusão mitocondrial
Beneficiário:Thiago Bittencourt Rodrigues
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
Processo FAPESP: 10/13384-3 - Efeito da introdução de de mitocôndrias embrionárias ou somáticas nos zigotos sobre o desenvolvimento e a herança mitocondrial em bovinos
Beneficiário:Flávio Vieira Meirelles
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo FAPESP: 12/50231-6 - Bases moleculares da herança mitocondrial: o papel da fusão mitocondrial
Beneficiário:Marcos Roberto Chiaratti
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Apoio a Jovens Pesquisadores
Processo FAPESP: 12/12951-7 - Transferência de citoplasma submetido ao estresse oxidativo como modelo para o estudo da herança de doenças mitocondriais
Beneficiário:Thiago Simões Machado
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Mestrado