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(Referência obtida automaticamente do Web of Science, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores.)

Determination of recombinant Interferon-alpha 2 in E. coil periplasmic extracts by reversed-phase high-performance liquid chromatography

Texto completo
Autor(es):
Dias, Paulo V. S. [1] ; Arthuso, Fernanda S. [1] ; Oliveira, Joao E. [1] ; Suzuki, Miriam F. [1] ; Sousa, Jose M. [1] ; Ribela, Maria Teresa C. P. [1] ; Bartolini, Paolo [1] ; Soares, Carlos R. J. [1]
Número total de Autores: 8
Afiliação do(s) autor(es):
[1] CNEN SP, IPEN, Biotechnol Ctr, Sao Paulo - Brazil
Número total de Afiliações: 1
Tipo de documento: Artigo Científico
Fonte: JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B-ANALYTICAL TECHNOLOGIES IN THE BIOMEDICAL AND LIFE SCIENCES; v. 1072, p. 193-198, JAN 1 2018.
Citações Web of Science: 1
Resumo

Reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) has been used to analyze Interferon alpha-2 (IFN-alpha 2) as a pure protein or as a pharmaceutical preparation: a method for analyzing periplasmic IFN-a2 directly in osmotic shock extract has, however, never been reported. This work describes an RP-HPLC methodology for the qualitative and quantitative analysis of human IFN-alpha 2a and IFN-alpha 2b directly in bacterial periplasmic extracts or in purified preparations. The analytical method has been set up and validated for accuracy, precision, linearity, sensitivity and specificity. A recovery test indicated an average bias of similar to 1%, intra-day and inter-day quantitative determinations presented relative standard deviations always <= 5%, while the working sensitivity was of similar to 0.3 mu g of IFN-alpha 2 (RSD = 5%). The method proved to be suitable for detecting and quantifying also glycosylated and oxidized forms and N-methionylated IFN-alpha 2 molecules, it was, however, not able to distinguish between IFN-alpha 2a and IFN-alpha 2b. This rapid methodology allows the application of RP-HPLC as a powerful tool to monitor the production yield and quality of IFN-alpha 2 in osmotic shock fluids, right after, or even during the fermentation process. (AU)

Processo FAPESP: 15/10928-6 - Desenvolvimento de processo de fermentação em biorreator para produção de interferon ±-2a secretado no espaço periplásmico de Escherichia coli
Beneficiário:Paulo Victor Sarmento Dias
Linha de fomento: Bolsas no Brasil - Mestrado
Processo FAPESP: 15/26058-0 - Estudo do perfil de N-glicosilação e dos sítios de ocupação em várias preparações de tireotropina humana (hTSH) hipofisária e recombinante
Beneficiário:Carlos Roberto Jorge Soares
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
Processo FAPESP: 12/24345-4 - Avaliação do potencial de antagonistas de prolactina para o tratamento da obesidade e do Diabetes mellitus 2
Beneficiário:Carlos Roberto Jorge Soares
Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular