| Texto completo | |
| Autor(es): |
Lopes Vilela, Adriana Ferreira
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Seidl, Claudia
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Lima, Juliana Maria
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Cardoso, Carmen Lucia
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Número total de Autores: 4
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| Afiliação do(s) autor(es): | [1] Univ Sao Paulo, Dept Quim, Grp Cromatog Bioafinidade & Prod Nat, Fac Filosofia Ciencias & Letras Ribeirao Preto, BR-14040901 Ribeirao Preto, SP - Brazil
Número total de Afiliações: 1
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| Tipo de documento: | Artigo Científico |
| Fonte: | Analytical Biochemistry; v. 549, p. 53-57, MAY 15 2018. |
| Citações Web of Science: | 7 |
| Resumo | |
Acetylcholinesterase (AChE) and butyrylcholinesterase (BChE) are key cholinesterase enzymes responsible for the hydrolysis of acetylcholine into choline and acetic acid, an essential process for the restoration of the cholinergic neuron. The loss of cholinergic function in the central nervous system contributes to the cognitive decline associated with advanced age and Alzheimer s disease (AD). Inhibitions assays represent a significant role in the drug discovery process Herein, we describe an improved label free method to screen and characterize new BChE ligands. The liquid chromatography system uses an immobilized capillary enzyme reactor (ICER) as a low affinity and high selectivity column coupled to a mass spectrometer (MS). The enzyme activity was evaluated by monitoring the choline's precursor ion {[}M + H](+) m/z 104 for a brief period. The method was validated using two known cholinesterase inhibitors tacrine and galanthamine. The IC50 values were 0 03 +/- 0.006 mu M and 0.88 +/- 0.2 for tacrine and galanthamine respectively, and Ki was 0.11 +/- 0.2 for galanthamine. The efficient combination of the ftuBChE-ICER with sensitive enzymatic assay detection such as MS, improved the reliable, fast identification of new ligands. Moreover, specific direct quantitation of the product contributes to the reduction of false positive and negative results. (AU) | |
| Processo FAPESP: | 16/02873-0 - Acetilcolinesterase e beta-secretase 1: estudo de condições de co-imobilização para triagem de ligantes |
| Beneficiário: | Adriana Ferreira Lopes Vilela |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Processo FAPESP: | 14/50299-5 - EMU - espectrômetro de massas modelo Amazon speed com fonte ESI e duplo funil de íons, analisador tipo íon TRAP |
| Beneficiário: | Quezia Bezerra Cass |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Programa Equipamentos Multiusuários |
| Processo FAPESP: | 14/11640-3 - Métodos LC-MS/2D para triagem de ligantes para a avaliação de atividade inibitória de enzimas e identificação dos compostos ativos em extratos brutos |
| Beneficiário: | Cláudia Seidl |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado |
| Processo FAPESP: | 14/06907-0 - Imobilização da enzima nucleosídeo difosfato quinase (NDK) de Leishmania major: do estudo de condições à aplicação na triagem de ligantes |
| Beneficiário: | Juliana Maria de Lima |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado Direto |