| Processo: | 14/11640-3 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado |
| Data de Início da vigência: | 01 de novembro de 2014 |
| Data de Término da vigência: | 31 de dezembro de 2017 |
| Área de conhecimento: | Ciências Exatas e da Terra - Química - Química Orgânica |
| Pesquisador responsável: | Carmen Lúcia Cardoso |
| Beneficiário: | Cláudia Seidl |
| Instituição Sede: | Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Vinculado ao auxílio: | 13/01710-1 - Ligantes enzimáticos: novos modelos de triagem, AP.TEM |
| Bolsa(s) vinculada(s): | 16/02941-5 - Desenvolvimento e otimização de metodologias bidimensionais de cromatografia líquida acopladas a bioensaios para a descoberta de inibidores enzimáticos em extratos de produtos naturais, BE.EP.PD |
| Assunto(s): | Produtos naturais Cromatografia de afinidade Enzimas Extratos vegetais Fármacos Doença de Alzheimer |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Cromatografia de bioafinidade | imobilização de enzimas | inibidores seletivos | métodos de triagem | Produtos Naturais | separações multidimensionais | Produtos Naturais |
Resumo A identificação de substâncias com atividade biológica em extratos naturais ou coleções sintéticas é uma etapa crucial e requer o uso de técnicas rápidas e eficientes de separação e de triagem. Esse paradigma estimula o desenvolvimento de novos métodos de triagem que facilitem e reduzam o tempo empregado na identificação dessas substâncias. Empregando-se técnicas cromatográficas, o isolamento de princípios ativos oriundos de um extrato natural raramente pode ser concretizado em uma única etapa cromatográfica. O emprego de métodos cromatográficos 2D é uma estratégia valiosa para se obter uma maior eficiência na separação com redução do tempo de análise. As separações 2D por cromatografia líquida já são bem estabelecidas e podem ser classificadas em abrangente, pseudo-abrangente e "heart-cutting". No modo abrangente (LCxLC) todo o efluente da primeira dimensão, ou parte representativa dele, é introduzida na segunda dimensão. Essa é a principal diferença quando comparada com a cromatografia liquida heart-cutting (LC-LC) na qual somente frações selecionadas são transferidas para a segunda coluna. Métodos clássicos de fracionamento de extratos naturais bioguiados envolvem alto consumo de tempo, enquanto que triagens off-line não resultam em informações sobre os compostos individuais e muitas vezes apresentam resultados falsos positivos ou falsos negativos. Uma alternativa promissora é o acoplamento das técnicas de separação cromatográfica, principalmente as multidimensionais com os ensaios biológicos, chamados de triagem de alta resolução. Dessa forma, é possível detectar a atividade biológica diretamente no eluente do LC e caracterizar quimicamente o(s) composto(s) biologicamente ativos on line, pelo MS, resultando em redução do tempo e trabalho despendidos na coleta das frações para posterior detecção de atividade. Para a realização dos ensaios biológicos on line, o emprego de enzimas imobilizadas é uma alternativa valiosa. As enzimas imobilizadas possuem maior estabilidade na presença de solventes orgânicos e variações de temperatura, além de permitir a reutilização e o uso de pequenas quantidades de enzima. Nesse contexto, a proposta desse projeto é o desenvolvimento de um método rápido on-line para identificação dos constituintes bioativos de extratos de plantas sem a necessidade de purificação prévia. O extrato é separado na primeira dimensão e as bandas cromatográficas são transferidas para o biorreator, onde a atividade inibitória é avaliada. ICERs (Immobilized capillary enzyme reactors) contendo as enzimas colinesterases acetilcolinesterase (AChE) e a butirilcolinesterase (BChE), foram desenvolvidos em nosso grupo de pesquisa e foram selecionadas como alvos enzimáticos modelo para esse projeto. Essas serinas hidrolases são responsáveis pela catálise da hidrólise do neurotransmissor, acetilcolina, durante as sinapses em terminações nervosas e são alvos de interesse nos estudos de desenvolvimento de fármacos para a Doença de Alzheimer. Além disso, por atuarem na transdução de sinais em animais, há um grande interesse na descoberta de inibidores dessas enzimas para serem utilizados na agricultura como pesticidas e contra insetos sociais. (AU) | |
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