Análise da regulação da expressão do gene SRY pelas proteínas SP1 e WT1

Resumo

Nos últimos anos houve um grande avanço no entendimento dos mecanismos envolvidos na determinação e diferenciação dos sexos; vários genes que participam desses processos foram descobertos e as formas como eles interagem tem sido intensamente investigada. Contudo, o conhecimento que se tem a respeito deste tema está longe de ser completo. No âmbito nacional e internacional, a combinação de profissionais das ciências básicas e clínicas tem sido de fundamental importância para o estabelecimento de mecanismos genéticos complexos que resultam da observação e da investigação minuciosa de pacientes com as várias desordens do desenvolvimento sexual. A expressão do gene SRY (Sex Determining Region in chromosome Y) constitui o primeiro passo para a diferenciação sexual masculina nos embriões de mamíferos. Este gene localizado no braço curto do cromossomo Y codifica uma proteína de 204 aminoácidos dos quais 79 constituem um domínio denominado HMG-box que confere à esta proteína a capacidade de interagir com o DNA. Este domínio é comum entre proteínas com função reguladora de expressão. A expressão normal do gene SRY durante a vida intra-uterina induz as gônadas indiferenciadas a transformarem-se em testículos a partir da diferenciação das células de Sertoli primordiais em células adultas. Desta maneira, mutações no gene SRY, dentro ou fora do domínio HMG-box causam disgenesia gonadal. Entretanto, em alguns casos desta deficiência não foram encontradas mutações na região codificante do gene. Com o intuito de esclarecer os mecanismos moleculares responsáveis por estes casos, estudos da região 5' não traduzida do gene SRY revelaram sítios de ligação a fatores de transcrição altamente conservados no genoma de diferentes espécies. Entre os sítios consenso detectados, dois deles interagem com o fator ubiquitinante Sp1 e foram então chamados Sp1A e Sp1B intercalados por um sítio WT1. Em um recente estudo foi detectada uma mutação naturalmente ocorrida no sítio Sp1A de um indivíduo com disgenesia gonadal pura. Outros membros da família apresentavam ambigüidade genital e seu pai, também portador da mutação, possuia grave hipospadia ao nascimento. Para tentar esclarecer os efeitos desta mutação nos mecanismos moleculares de regulação da expressão do gene SRY, este trabalho visa analisar a interação das proteínas Sp1 e WT1 com os sítios localizados na região promotora de SRY e o efeito da mutação nesta interação. Serão utilizados ensaios de EMSA para avaliar a ligação e ensaios de expressão de gene repórter para avaliar expressão in vitro de um gene repórter sob o controle da região promotora contendo a mutação no sítio Sp1A em diferentes linhagens celulares.