Estudos funcionais e estruturais de proteínas humanas reguladoras envolvidas em câncer

Resumo

Pretendemos estudar a função e estrutura de proteínas humanas reguladoras envolvidas em câncer. As funções e as estruturas das proteínas Ki-1/57, CGI-55, Fez1 e Nek (1,6,8,9) ainda não são conhecidas. Através de estudos feitos anteriormente no nosso grupo identificamos várias proteínas envolvidas em processos de sinalização e regulação que interagem com essas proteínas e estudos de microarray de DNA e outras análises tanto do nosso grupo como de outros da literatura demonstraram que os níveis de expressão dos mRNAs destas proteínas estão aumentadas (ou alteradas) em alguns tipos de câncer. O mRNA da stanniocalcina 1 (STC1) também é sete vezes mais expresso em células de estroma que foram colocadas em contato com células leucêmicas sugerindo que ela possa ser uma proteína candidata de marcador do microambiente tumoral. STC1 é uma proteína secretada, mas tanto sua função quanto seu receptor são ainda desconhecidos. Neste projeto pretendemos estudar a estrutura dessas proteínas ou de seus domínios através de métodos espectroscópicos e cristalograficas. Ainda analisaremos suas funções usando várias técnicas de biologia molecular, incluindo entre outras: 'silenciamento gênico' (método de RNAi), identificação de modificações pós-traducionais (espectrometria de massa), identificação de proteínas que interagem in vitro (sistema duplo híbrido em levedura) e in vivo (espectrometria de massa), SELEX ("Systematic Evolution of Ligands by eXponential Enrichment"), microarrays de DNA, análises da localização sub-celular (super-expressão de proteínas em fusão com GFP) e de função e interação em células humanas (sistema duplo híbrido em células de mamíferos), ensaios de quinases e testes de seus inibidores in vitro, entre outros. Com o conjunto de resultados esperamos de entender melhor a função e regulação destas proteínas no contexto do câncer e de obter novas pistas de tratamento de câncer (inibidores de quinases para Neks) e novos insumos no diagnóstico do mesmo (STC1, ELISA kit, RT-PCR). (AU)