Pesquisa de mutações no gene DMRT1 em pacientes portadores de distúrbios do desenvolvimento sexual 46,XY e 46,XX por anormalidades gonadais

Resumo

A determinação sexual nos mamíferos constitui a etapa inicial do complexo processo do desenvolvimento sexual, do qual participam inúmeros genes, fatores transcricionais, moléculas sinalizadoras, hormônios e seus receptores. Durante este processo, a gônada embrionária indiferenciada (bipotencial) passa por uma transformação estrutural que determinará uma gônada feminina ou masculina. Os eventos subsequentes à determinação da gônada promoverão a diferenciação das genitálias interna e externa. Em humanos, mutações em diversos genes como: SRY, SOX9, SF1/NR5A1, WT1 e DHH; assim como o desequilíbrio na dosagem gênica por duplicações do locus DSS (genes DAX1-NROB1/ MAGEB) ou dos genes WNT4/RSPO-1 e deleções da região 9p24.3 (DMRT1), foram descritas em pacientes 46,XY portadores de distúrbios do desenvolvimento sexual (DDS) por anomalias do desenvolvimento gonadal associados em diversos casos a quadros sindrômicos. O conhecimento em relação aos genes envolvidos no processo de determinação gonadal feminina tem aumentado expressivamente nos últimos anos, mudando o conceito inicial do desenvolvimento passivo da gônada feminina. Genes como FOXL2, GDF9 e BMP15 estão relacionados ao fenótipo de disgenesia gonadal 46,XX e/ou falência ovariana prematura. Deleções do cromossomo 9p foram associadas a distúrbios do desenvolvimento sexual, indicando que esta região contém genes essenciais para o desenvolvimento gonadal. O gene DMRT1 está localizado no braço curto do cromossomo 9 na região p24.3. Em camundongos o Dmrt1 é detectado entre o 10.5 ao 11.5 d.p.c. nas gônadas bipotenciais em ambos os sexos. A partir do 12.5 d.p.c. os transcritos do gene se localizam nas células de Sertoli e nas células germinativas do testículo. O Dmrt1 exerce um papel na diferenciação das células de Sertoli e em relação às células germinativas controla sua migração radial e sua sobrevivência nos períodos fetal e pós-natal. No camundongo XX mutante para o gene Dmrt1 -/- e Dmrt1 +/- observou-se a presença de ovários normais e de fertilidade nestes animais. Apesar disso, deleções na região onde o gene está localizado no cromossomo 9 já foram descritas em pacientes XX e demonstraram uma associação à espectros de desenvolvimento gonadal que vão do ovário normal á ovários severamente disgenéticos. O objetivo deste projeto é pesquisar a presença de deleções do gene DMRT1 e de mutações inativadoras neste gene em um grupo de 40 pacientes portadores de DDS por anormalidades do desenvolvimento gonadal 46,XY e 52 pacientes 46,XX, sendo 25 pacientes portadoras de disgenesia gonadal e 27 pacientes portadoras de falência ovariana prematura. A metodologia de estudo proposta objetivando o estudo do efeito de dosagem do gene DMRT1 será a técnica de MLPA. Para a pesquisa de mutações inativadoras neste gene será realizada a amplificação do DNA genômico pela reação de polimerização em cadeia (PCR) usando oligonucleotídeos específicos para o gene DMRT1 seguida pelo seqüenciamento das amostras. Os resultados deste projeto poderão contribuir com informações importantes e inéditas para a compreensão do real papel do DMRT1 na etiologia dos DDS 46,XY e 46,XX. (AU)