ASSOCIAÇÃO ENTRE EXPRESSÃO DE RECEPTORES TLR2 E TLR4, DE FATOR DE TRANSCRIÇÃO NUCLEAR NF-kB E PRODUÇÃO DE IL-10, IL-12 E TNF-ALFA POR MONÓCITOS DE GESTANTES PORTADORAS DE PRÉ-ECLÂMPSIA.

Resumo

A pré-eclâmpsia é uma síndrome específica da gestação caracterizada por uma resposta inflamatória sistêmica, de maior intensidade do que a observada na gestação normal. Células do sistema inflamatório como monócitos e granulócitos encontram ativadas endogenamente e secretam níveis elevados de radicais livres e citocinas inflamatórias. Os objetivos deste projeto são: 1) Avaliar o estado de ativação endógena de monócitos pela expressão de receptores TLR2 e TLR4, bem como da ativação do fator de transcrição nuclear NF-kB nessas células em gestantes portadoras de pré-eclâmpsia; 2) Correlacionar a expressão de TLR2 e TLR4 em monócitos de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia precoce ou tardia com a produção de IL-10, IL-12 e TNF-alpha por essas células estimuladas com peptideogligano (PG) e lipopolissacáride (LPS), considerados agentes agonistas de TLR2 e TLR4 respectivamente; 3) Verificar se os parâmetros estudados diferenciam pré-eclâmpsia precoce e tardia. Serão estudadas 48 gestantes, sendo 16 normotensas e 32 portadoras de pré-eclâmpsia, pareadas pela idade gestacional. As gestantes com pré-eclâmpsia serão classificadas de acordo com o aparecimento das manifestações clínicas em pré-eclâmpsia precoce (< 34 semanas de gestação) e pré-eclâmpsia tardia (e 34 semanas de gestação). Monócitos de sangue periférico obtidos de gestantes normais ou com pré-eclâmpsia serão incubados na presença ou ausência de lipopolissacáride de Escherichia coli (LPS) ou de peptidoglicano (PG) de bactéria Gram-positiva. O sobrenadante obtido após 18h de cultivo será aspirado e empregado para dosagem das citocinas TNF-alpha, IL-10 e IL-12, pela técnica de ELISA. A ativação do fator NF-kB será determinada em extrato nuclear de monócitos obtidos logo após a coleta de sangue, por kit específico. A expressão dos receptores TLR2 e TLR4 presentes na superfície dos monócitos será avaliada por citometria de fluxo, empregando-se anticorpos monoclonais específicos, marcados com fluorocromos logo após a coleta do sangue (expressão endógena dos receptores) ou após 18 h de incubação com LPS ou PG (expressão ativada). O envolvimento dos receptores TLR2 e TLR4 na produção de citocinas pelos monócitos será avaliado pelo bloqueio desses receptores com anticorpos monoclonais específicos anti-TLR2 e TLR4 antes da incubação das células com o estímulo pelo agonista específico (LPS - TLR4 e PG - TLR2) e avaliação das citocinas no sobrenadante, após 18 h de cultura.