Efeito imunomodulador de baixas concentrações de antineoplásicos

Resumo

Estudos prévios do grupo demonstraram que o tratamento de células de câncer colorretal humano HCT-116 com concentrações não-tóxicas das drogas antineoplásicas paclitaxel (PAC) ou doxorrubicina (DOX) induz alterações na transcrição de uma ampla variedade de genes. O tratamento foi também capaz de tornar as células tumorais mais imunogênicas, bem como mais sensíveis à atividade de células T citotóxicas (CTL) geradas in vitro. Entre os genes, cuja transcrição foi aumentada pelo pré-tratamento empregado, encontram-se os responsáveis pela expressão das proteínas de choque térmico (HSP40 e HSP70). As HSPs são chaperones que dirigem a cross-presentation de peptídeos antigênicos associados às moléculas de classe I e podem atuar como ativadores de células imunocompetentes, desempenhando importante papel na ativação de macrófagos e linfócitos, e na ativação e maturação de células dendríticas (DCs). Assim, no presente trabalho avaliaremos se as alterações transcricionais dos genes de HSPs, previamente detectadas por DNA microarray, se traduzem no aumento da expressão das proteínas. Confirmado o fenômeno, testaremos a hipótese de que o aumento da imunogenicidade das células de câncer colorretal é decorrente do aumento da expressão das HSPs. Com esse propósito, células tumorais HCT-116 e HT-29 serão tratadas com concentrações efetivas mínimas (CEM; concentrações citostáticas) e concentrações não-tóxicas (CNT) de 5-fluorouracil (5-FU) ou PAC, e serão submetidas à análise semi-quantitativa da expressão de HSP40 e HSP70 pelo método de dot-blot e à análise qualitativa através de ensaio imunocitoquímico. As células tratadas com essas drogas serão usadas para sensibilizar DCs humanas geradas a partir de monócitos de sangue periférico de doadores normais, para avaliar o efeito da expressão das HSPs sobre a função das DCs.