Análise da expressão de marcadores de morte celular em lesões potencialmente malignas induzidas em língua de ratos e tratadas com terapia fotodinâmica

Resumo

O uso da terapia fotodinâmica (TFD) no tratamento de lesões potencialmente malignas orais (LPM) tem sido alvo de pesquisas recentes. Essa terapia consiste na interação da energia eletromagnética com um fotossensibilizador e o oxigênio tecidual, havendo a geração de espécies reativas de oxigênio capazes de promover a morte de células metabolicamente mais ativas. O objetivo deste estudo é estabelecer a relação anatomocronológica da morte celular presente durante a TFD mediada pelo ácido aminolevulínico (ALA) em LPM induzidas quimicamente em ratos. Serão feitas aplicações tópicas semanais de solução de 4-nitroquinolina-1-óxido (4NQO) na mucosa lingual de ratos, até o surgimento de lesões brancas detectadas clinicamente. No grupo teste, as lesões serão tratadas uma única com vez com terapia fotodinâmica, aplicando-se topicamente o ALA sobre as lesões e, após 2h, irradiando-se com laser de baixa potência (660nm, 1,5 min, 40mW, 3,6J, 90J/cm2). Os animais sofrerão eutanásia nos períodos de 6h, 24h, 48h e 5 dias após a aplicação da TFD. Será analisada a expressão imunoistoquímica e por Western blot das proteínas beclin-1 (para análise de autofagia), caspase 3, NF-kB p65 (para análise da apoptose e anti-apoptose), RIP-1 (para análise de necrose), superoxido dismutase 1 (SOD-1) e óxido nítrico sintase induzível (iNOS) (para análise do estresse oxidativo), bem como será feita quantificação de vasos sanguíneos positivos para anticorpo anti-CD34. Espera-se que a TFD aumente a expressão das proteínas de morte e de estresse oxidativo, bem como diminua a quantidade de vasos sanguíneos com um padrão tempo-dependente. Com esses resultados, será possível conhecer melhor a relação entre os mecanismos de morte e o tempo, fornecendo subsídios para o desenvolvimento de protocolos tópicos de TFD para essas lesões. (AU)