Intein ThrRS em espécies do gênero Candida: filogenia, potencial marcador molecular e alvo terapêutico

Resumo

Inteins ou internal proteins, são considerados elementos genéticos parasitas, pois utilizam o maquinário celular de replicação para se manter e em alguns casos se propagar na população. São sequências gênicas inseridas em genes codificadores conservados, as quais são transcritas e traduzidas juntamente com o gene hospedeiro, para então serem excisadas autocataliticamente, permitindo assim a funcionalidade normal da proteína hospedeira ou extein. O intein ThrRS ocorre no gene ThrRS (treonil RNAt-sintetase) de Candida tropicalis e nas espécies do complexo psilosis, composto por: C. parapsilosis, C. orthopsilosis e C. metapsilosis; estes dois últimos foram descritos no projeto FAPESP 2010/02674-0 em que o potencial marcador molecular deste elemento genético parasita foi sugerido. Devido à importância da proteína ThrRS, o intein ThrRS é considerado um importante alvo terapêutico para a avaliação de drogas que possam inibir o seu splicing, inviabilizando assim a função do ThrRS e, portanto, a sobrevivência da célula fúngica. Este projeto tem como objetivo o estudo de duas vertentes: biologia evolutiva e aplicada. A evolutiva visa o estudo da funcionalidade do intein ThrRS deduzida pelo grau de conservação dos motifs referentes aos domínios splicing e HE, bem como o estudo filogenético deste intein em espécies do complexo psilosis. A frente aplicada explorará o potencial terapêutico deste intein pelo desenvolvimento de um sistema de avaliação da atividade splicing do intein ThrRS no plasmídeo pMST a partir de uma proteína não-nativa em um modelo de E.coli, o que será útil para futuros testes de drogas anti-fúngicas inibidoras do splicing protéico. A ação da droga antineoplásica cisplatina, que sabidamente inibe o splicing do intein RecA, de Mycobacterium tuberculosis, será testada no modelo não-nativo desenvolvido em E. coli, para o intein ThrRS de C. parapsilosis, e também no crescimento in vivo de espécies de Candida com e sem o intein ThrRS. Portanto, o desenvolvimento deste projeto deverá possibilitar obter um maior conhecimento do padrão de distribuição deste elemento genético parasita nestas espécies de leveduras de interesse médico, seus perfis moleculares e filogenéticos, além de fornecer subsídios para novas alternativas terapêuticas e de diagnóstico. (AU)