Análise de polimorfismos das enzimas ciclooxigenase-2 e metilenotetrahidrofolato redutase em pacientes com câncer do esôfago

Resumo

O estudo de polimorfismos genéticos pode permitir maior conhecimento sobre os fatores de risco, progressão, susceptibilidade, e possivelmente esclarecimento sobre a associação com dados clínicopatológicos no câncer do esôfago. A ciclooxigenase-2 (COX-2) é induzida em resposta ao fator de crescimento e citocinas, sendo expressa nas doenças inflamatórias, lesões pré-malignas e tumores de esôfago. O produto do metabolismo do folato pela enzima metilenotetrahidrofolato redutase atua na síntese do DNA, a alteração ou a inibição da atividade desta enzima aumenta a suscetibilidades a mutações, danos e alteração da metilação do DNA, transformando a expressão gênica de supressores de tumor e proto-oncogenes, potenciais fatores de risco para o câncer de esôfago. Esta pesquisa tem como objetivo investigar a frequência dos polimorfismos do COX-2 (-1195A>G, -765G>C, 8473T>C e -1759G>A), e do MTFR (677C>T e 1298C>A) em pacientes com câncer de esôfago. Cento e cinquenta pacientes com o diagnóstico de adenocarcinoma ou carcinoma de células escamosas do esôfago histologicamente confirmado, admitidos no Projeto Genoma Clínico do Câncer da FAPESP no Hospital das Clínicas de São Paulo formam o grupo caso do presente estudo. Todos os pacientes foram submetidos à ressecção cirúrgica, no período de junho de 2001 a janeiro de 2008. O mesmo número de indivíduos operados por doença benigna no Hospital das Clínicas de São Paulo, pareados quanto ao sexo e idade, sem histórico individual ou familial de câncer constituirão o grupo controle. O trabalho será realizado no Laboratório de Cirurgia Experimental - LIM 37 Setor de Biologia Molecular, Disciplina de Transplante de Fígado - FMUSP/Departamento de Gastroenterologia. O DNA genômico será isolado do creme leucocitário utilizando-se kit de extração e purificação PureLink" Genomic DNA Mini Kit. A técnica de identificação da base com uso de sondas marcadas com fluoróforos TaqMan ® SNP Genotyping Assays (Applied Biosystems, Foster City, EUA), seguida pela amplificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e análise em tempo real será utilizada na genotipagem dos polimorfismos do COX-2 e MTFR , através dos kits TaqMan® Pre-Designed SNP Genotyping Assay para os SNPs: COX-2 -1195A>G (rs689466), COX-2+8473T>C (rs5275), COX-2-1759G>A (rs 3218625), MTHFR C677T (rs1801133), MTHFR A1298C (rs1801131) e o Custom TaqMan® SNP Genotyping Assay para o SNP COX-2 -765G>C (rs20417). Para a análise de expressão tecidual será utilizado o arranjo em matriz tecidual (tissue microarray- TMA) a partir dos blocos fixados em formaldeído e parafinados, de tumores do esôfago. A análise imunohistoquímica será realizada utilizando-se a técnica da imunoperoxidase com os anticorpos monoclonais contra COX-2. Os resultados dos polimorfismos encontrados serão associados aos dados epidemiológicos, clinicopatológicos e imunohistoquímicos destes pacientes. (AU)