Modulação pela proteína p53 da morte celular autofágica induzida por terapia fotodinâmica

Resumo

A Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade terapêutica alternativa aos tratamentos convencionais do câncer. Essa terapia utiliza luz visível, um fotossensibilizador (FS) e oxigênio molecular para induzir a morte das células tumorais, a destruição vascular e a estimulação do sistema imune. A TFD pode induzir tanto morte celular não programada (necrose) quanto morte celular programada tipo I (apoptose) e tipo II (morte celular autofágica). A autofagia em si é uma via eucariótica conservada de degradação e reciclagem de macromoléculas e organelas celulares danificadas. Em pesquisa recente realizada no Laboratório de Processos Fotoinduzidos e Interfaces do IQ-USP, identificou-se que a interrupção do fluxo autofágico como resultado de danos oxidativos em mitocôndrias e lisossomos decorrentes da TFD leva à morte celular com características autofágicas. A indução de morte celular autofágica é interessante nos casos em que há um defeito na célula tumoral na via de morte por apoptose, o que é característico de muitos cânceres. A proteína supressora de tumor p53 está envolvida em inúmeros processos celulares, inclusive apoptose e autofagia. Acreditamos que o nível de expressão de p53 deve ser importante para a resposta celular à TFD. Assim, o presente projeto visa verificar se a proteína p53 modula a morte celular autofágica induzida por TFD e, também, identificar possíveis alvos envolvidos. Para isso, serão utilizadas linhagens celulares HEK293 silenciadas para o gene p53 (cerca de 90% e 50% de supressão da expressão) e o respectivo controle; os FS azul de metileno e dimetil azul de metileno, e luz a 630 nm (LED vermelho). Após a TFD in vitro, serão avaliados: a fotocitotoxicidade dos fotossensibilizadores, o mecanismo de morte celular fotoativado, o estado redox celular e os níveis protéicos de intermediários-chave da via de morte celular autofágica; relacionando a eficiência da TFD e o tipo de morte celular desencadeado com o nível de expressão de p53. (AU)