Nova técnica de análise espermática por citometria de fluxo: validação e aplicação prática

Resumo

O presente projeto de pesquisa pretende desenvolver duas novas técnicas de análise espermática por citometria de fluxo e posterior aplicação prática das mesmas para as análises do experimento 1 do projeto de bolsa de mestrado no país em vigor sob processo número 2013/08070-8. Será desenvolvida uma técnica de coloração quadrupla que permitirá a análise simultânea da integridade de membrana plasmática e acrossomal e potencial de membrana mitocondrial excluindo-se os debris celulares. Anteriormente as coletas de sêmen para a validação da técnica, serão realizados os controles de cada sonda fluorescente, em separado, a fim de possibilitar a compensação do spectral overlap no software BD FACS Diva 6.1. A validação da técnica de tripla coloração será realizada com a coleta de nove ejaculados de cachaços os quais serão divididos entre os cinto tratamentos 100 (100% de células do ejaculado in-natura), 75 (75% de células do ejaculado in-natura e 25% de células mortas), 50 (50% de células do ejaculado in-natura 50% de células mortas), 25 (25% de células do ejaculado in-natura 75% de células mortas) e 0 (100% de células mortas). (AU)