Avaliação dos mecanismos celulares e moleculares do creme à base de lupeol sobre o processo de cicatrização de feridas cutâneas em modelos experimentais de ratos diabéticos e não diabéticos

Resumo

A dificuldade de cicatrização de feridas é uma das principais complicações decorrentes do diabetes mellitus (DM), que torna o processo cicatricial mais lento e o tratamento mais dispendioso. Tal processo é dividido em três fases sobrepostas: fase inflamatória, cujos principais eventos são a hemostasia e a inflamação, fase proliferativa, na qual há a formação do tecido de granulação, e fase de remodelamento da matriz extracelular. Sabe-se que o elevado nível de estresse oxidativo e a persistência do processo inflamatório contribuem para o atraso da cicatrização de feridas cutâneas em pacientes diabéticos. O lupeol é um triterpeno encontrado em diversos vegetais como, figo, manga, cenoura, soja, semente de melão, uvas, própolis e possui diversas atividades biológicas já comprovadas. Sendo assim, o presente projeto tem por objetivo investigar o efeito e mecanismos envolvidos na ação cicatrizante do creme à base de lupeol em feridas cutâneas de ratos diabéticos (RD) e ratos não diabéticos (RND). Para isso, ratos Wistar machos (n=8) serão randomicamente divididos nos seguintes grupos experimentais: creme base (controle RND), colagenase (controle positivo RND), creme à base de lupeol 0,1%, 0,2% e 0,4% em RND, creme base (controle RD), creme à base de insulina (controle positivo RD) e creme à base de lupeol (menor dose efetiva em RND) em RD. A indução experimental de diabetes será por única aplicação intraperitoneal de estreptozotocina na dose de 55 mg/kg. Após comprovado o estado diabético dos animais, procederá a anestesia e, posteriormente, a confecção de feridas na região dorsal com o auxílio de um punch de 2 cm de diâmetro. As lesões serão tratadas e medidas com paquímetro digital uma vez por dia durante 3, 7 ou 14 dias (de acordo com as fases descritas na literatura). Após a eutanásia, a região da ferida será destinada a análises histológicas (contagem de células inflamatórias, escore inflamatório, deposição e morfologia das fibras colágenas), morfométricas (altura do epitélio de regeneração, espessura da epiderme e derme) e imunohistoquímicas (fatores de crescimento epidermal e vascular endotelial, proliferação celular e resposta inflamatória), determinação de colágeno, além de análises moleculares (qPCR e RT-PCR) para colágeno I e III e fatores de crescimento como TGF-²1 e EGF. Será determinada também a atividade antioxidante (glutationa reduzida, glutationas redutase e peroxidase, superóxido dismutase e mieloperoxidase), atividade anti-inflamatória por meio do método de zimografia em gel para determinação da atividade enzimática de metaloproteinases MMP-2 e MMP-9 e dosagem de citocinas em soro sanguíneo pelo método de Elisa (TNF-±, IL-1², IL-6 e IL-10). Este trabalho de investigação está ligado ao projeto de auxílio à pesquisa aprovado pela FAPESP "Processo cicatricial em pele sob tratamento com monoterpeno (Mentol) e triterpeno (Lupeol) em modelos experimentais" processo 2013/23340-1, do qual contribuiu bastante para a implantação desta linha de pesquisa no laboratório, assim como na formação de recursos humanos. (AU)